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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 綜合其他 » DNA提取常見問題
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科研戰(zhàn)神·王鐵蟲 (小有名氣)
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DNA提取常見問題
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DNA提取常見問題 DNA提取，是科研實驗室常用的實驗步驟，提取DNA的質(zhì)量直接影響后續(xù)的檢測工作，今天小助手將常見的問題進行了一個總結，供大家參考。 一、A260/280比值較低？或者A260/280比值較高？ 用水作為洗脫液比較偏低，或者蛋白質(zhì)殘留，但如果操作過程中使用了苯酚，則更可能是苯酚殘留。而比較高可能是大量RNA殘留，沒有使用RNaseA，或RNaseA活性下降。 A260值提示的含量與電泳檢測時提示的含量有可見的誤差則為苯酚殘留。 二、提取的細菌基因組DNA有降解，為什么？ 三、提取的基因組DNA生物活性差，為什么？ 提取的基因組DNA中鹽分濃度過高，請嚴格按照說明書操作。 提取的基因組DNA中含有乙醇。離心的速度和時間應該嚴格遵循說明書要求進行。 四、為什么用酚與氯仿抽提DNA時，還要加少量的異戊醇？ 在抽提DNA時，為了混合均勻，必須劇烈振蕩容器數(shù)次，這時在混合液內(nèi)易產(chǎn)生氣泡，氣泡會阻止相互間的充分作用。加入異戊醇能降低分子表面張力，所以能減少抽提過程中的泡沫產(chǎn)生。一般采用氯仿與異戊醇為24:1之比。也可采用酚、氯仿與異戊醇之比為25:24:1（不必先配制，可在臨用前把一份酚加一份24:1的氯仿與異戊醇即成），同時異戊醇有助于分相，使離心后的上層水相，中層變性蛋白相以及下層有機溶劑相維持穩(wěn)定。 |
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