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模型鼠之急性腎損傷動(dòng)物模型
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AKI 是一種多學(xué)科的臨床常見(jiàn)危重病癥，病因復(fù)雜，涉及膿毒血癥、血液動(dòng)力學(xué)異常、腎毒性等因素。 AKI動(dòng)物模型的建立方法較多，從機(jī)制上可分為中毒性（藥物誘導(dǎo)）AKI動(dòng)物、缺血性AKI動(dòng)物模型兩類。 藥物誘導(dǎo)模型的方法包括：順鉑、氨基糖甙類抗生素、阿霉素、氯化汞、氟化鈉等方法。 缺血性 AKI 模型方法包括：一側(cè)腎缺血/再灌注加對(duì)側(cè)腎切除法、雙側(cè)腎蒂夾閉法、注射甘油法、去甲腎上腺素滴注法、油酸法等。 應(yīng)用動(dòng)物有豬、犬、兔、大鼠、小鼠等。 缺血性AKI模型 缺血性腎損傷是 AKI 中最常見(jiàn)的類型，建立合適的缺血性 AKI 動(dòng)物模型有利于對(duì)該病的病理機(jī)制與治療方法的深入研究。 目前缺血性 AKI 動(dòng)物模型的常見(jiàn)制模方法包括血流阻斷法、低灌注法、藥物注射法、擠壓法、遠(yuǎn)端器官缺血誘導(dǎo)法等。 1、血流阻斷法 1.1 雙側(cè)腎動(dòng)脈夾閉法（雙側(cè)腎蒂鉗閉法） 雙側(cè)腎動(dòng)脈夾閉法是目前國(guó)內(nèi)最常用的缺血性 AKI 動(dòng)物制模方法。 制模方法舉例： 以雄性 SD 大鼠為例，麻醉后行腹部正中切口，找到腎蒂后進(jìn)行鈍性分離，用無(wú)損傷微型動(dòng)脈夾迅速阻斷雙側(cè)腎動(dòng)脈（30、45、60 min），腎臟色澤由紅色變?yōu)樽习岛笏砷_(kāi)血管夾，腎臟顏色由黑色逐漸轉(zhuǎn)為紅色，說(shuō)明建模成功。 研究表明，腎臟缺血時(shí)間與損傷程度成正比，通過(guò)控制腎動(dòng)脈夾閉時(shí)間可建立腎臟中度（夾閉腎動(dòng)脈 20 min）或嚴(yán)重（夾閉腎動(dòng)脈≥30 min）損傷的 AKI 模型。如果雙側(cè)腎臟缺血時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，腎臟受損嚴(yán)重，動(dòng)物存活時(shí)間將會(huì)縮短，因此，合理控制腎臟缺血時(shí)間對(duì)成功制備 AKI 模型至關(guān)重要。 由于分離腎動(dòng)脈的過(guò)程復(fù)雜，有學(xué)者提出了腎動(dòng)靜脈結(jié)扎法（結(jié)扎腎蒂）。結(jié)扎腎動(dòng)靜脈導(dǎo)致血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）持續(xù)升高，并明顯高于單純結(jié)扎腎動(dòng)脈，且操作過(guò)程更加簡(jiǎn)潔。 雙側(cè)腎動(dòng)脈夾閉法操作簡(jiǎn)便、快速，是目前最常用的 AKI 制模方法，但夾閉腎動(dòng)脈的同時(shí)也容易導(dǎo)致動(dòng)物血壓的波動(dòng)，增加手術(shù)創(chuàng)傷和術(shù)后感的可能。 1.2 單側(cè)腎 I/R 法： 制模方法舉例： 采用腹部旁正中切口，分離并夾閉大鼠左腎動(dòng)脈，至腎臟表面由亮紅色變?yōu)榧t棕色，即實(shí)現(xiàn)了腎動(dòng)脈完全性?shī)A閉；45 min 后取下血管夾，觀察到腎臟恢復(fù)至亮紅色，即實(shí)現(xiàn)了再灌注，隨后縫合切口。腎組織病理學(xué)觀察結(jié)果提示，左側(cè)腎小管擴(kuò)張、上皮細(xì)胞空泡形成及脫落，腎間質(zhì)水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；擴(kuò)散加權(quán)成像提示，左側(cè)腎臟表觀擴(kuò)散系數(shù)降低，同時(shí)左側(cè)腎外髓外帶中損傷最明顯。 采用單側(cè)腎I/R法制備AKI模型，發(fā)現(xiàn)3h即出現(xiàn)明顯的腎小管損傷，SCr 和 BUN 開(kāi)始升高，并隨著時(shí)間延長(zhǎng)損傷逐漸加重，48 h 達(dá)到高峰，提示腎臟損傷程度與 I/R 時(shí)間呈正相關(guān)。 由于健側(cè)腎臟的代償作用，動(dòng)物短期死亡率低，更適用于缺血性腎損傷引起的腎臟纖維化或硬化等遠(yuǎn)期損傷研究；同時(shí)，健側(cè)腎臟的代償作用也會(huì)導(dǎo)致腎功能指標(biāo)不能有效反映患側(cè)腎損傷程度，因此體外監(jiān)測(cè)腎功能變化頗有難度。 1.3 一側(cè)腎 I/R 聯(lián)合對(duì)側(cè)腎切除法： 一側(cè)腎 I/R 聯(lián)合對(duì)側(cè)腎切除是建立急性腎 I/R 損傷十分常用的方法，且動(dòng)物模型穩(wěn)定、典型。 制模方法舉例： 麻醉小鼠后行腹正中切口，暴露右側(cè)腎蒂行右腎切除術(shù)，用非創(chuàng)傷性微血管鉗分離左側(cè)腎蒂并夾閉 30 min 后，恢復(fù)灌注，確保回流后再觀察 5 min，經(jīng)腹部注入 8 mL/kg 生理鹽水后縫合切口，成功建立了 AKI 模型。有學(xué)者夾閉動(dòng)物腎動(dòng)脈 45 min 或 60 min 后恢復(fù)灌注也可成功制模，且?jiàn)A閉時(shí)間越長(zhǎng)，腎損傷越嚴(yán)重。 該制模方法造成的病理學(xué)損傷較雙側(cè)腎蒂鉗閉法更顯著，且呈更明顯的漸進(jìn)性變化，但實(shí)驗(yàn)過(guò)程涉及腎臟切除，對(duì)操作者的技術(shù)要求更加嚴(yán)格。 2、低灌注法 2.1 腹主動(dòng)脈結(jié)扎法 腹主動(dòng)脈結(jié)扎法屬于低灌注法之一。 制模方法舉例： 麻醉動(dòng)物后，經(jīng)右股動(dòng)脈插入導(dǎo)管監(jiān)測(cè)血壓；行腹部正中切口，切除右腎；在腸系膜上動(dòng)脈及左腎動(dòng)脈之間的腹主動(dòng)脈下穿入一條縫線，將縫線兩端合攏并沿同一方向旋轉(zhuǎn)，逐漸壓迫腹主動(dòng)脈，保持沿股動(dòng)脈導(dǎo)管測(cè)得的血壓為 20.3～24.8 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa），維持腎臟低灌注1 h 后解除壓迫；制模后可見(jiàn) SCr 升高。亦有學(xué)者通過(guò)夾閉大鼠腎下腹主動(dòng)脈120 min、再灌注120 min成功建立AKI模型。 臨床上缺血性 AKI 多繼發(fā)于腎臟持續(xù)低灌注，通過(guò)結(jié)扎腎下腹主動(dòng)脈引起腎臟缺血缺氧，再灌注時(shí)伴隨大量氧自由基流經(jīng)腎臟，造成腎臟急性損傷。該制模方法可用于模擬血流低灌注狀態(tài)下的腎損傷，與臨床患者病情更為貼近。 2.2 雙側(cè)腎動(dòng)脈不完全結(jié)扎法 臨床上極少由于腎血流完全阻斷造成腎缺血損傷，故有學(xué)者提出了腎動(dòng)脈不完全結(jié)扎法。 制模方法舉例： 麻醉后行腹部正中切口，分離兩側(cè)腎動(dòng)脈，用結(jié)扎線將直徑 0.90 mm 的漁線分別與左、右腎動(dòng)脈一起結(jié)扎，隨即抽出漁線，完成雙側(cè)腎動(dòng)脈不完全結(jié)扎；20 min 后松解結(jié)扎線，恢復(fù)腎血流。 研究發(fā)現(xiàn)，雙側(cè)腎動(dòng)脈不完全結(jié)扎后，動(dòng)物腎血流和尿量均減少，SCr 升高；同時(shí)血 K+ 升高，pH 值、HCO3- 及剩余堿（BE）降低。 該制模方法體現(xiàn)了腎缺血因素在 AKI 發(fā)生及治療方面的臨床意義。 2.3 失血性休克法 失血性休克法是一種利用大量失血導(dǎo)致周?chē)h(huán)障礙，腎臟持續(xù)低灌注、缺血誘導(dǎo)AKI的方法，可分為定容量型和定壓型。 ① 定容量型模型以失血量達(dá)到動(dòng)物體重或總血量的百分比為目標(biāo)。 ② 定壓型模型以血壓下降為目標(biāo)。 失血性休克法制備 AKI 模型需要在制模中密切監(jiān)測(cè)動(dòng)物的血壓及體溫，手術(shù)過(guò)程較復(fù)雜，存在較多不穩(wěn)定因素，如動(dòng)物體溫、血液流動(dòng)性等，對(duì)操作能力及實(shí)驗(yàn)條件要求較高。 此外，采用中度失血聯(lián)合腎蒂夾閉也可成功制備失血性休克致 AKI 模型。 該制模方法可用于模擬臨床失血性休克導(dǎo)致 AKI的病理生理機(jī)制，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性高，可有效減少循環(huán)血容量，同時(shí)可避免繁瑣的手術(shù)操作及密切的血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)。 3、遠(yuǎn)端器官缺血誘導(dǎo)法 遠(yuǎn)端器官缺血誘導(dǎo)法是一種多用在肝、腸等遠(yuǎn)端器官因 I/R 損傷引起的缺血性 AKI 動(dòng)物模型制備方法。肝、腸等遠(yuǎn)端器官 I/R 的同時(shí)，導(dǎo)致腎臟灌注不足，GFR 降低，引發(fā) AKI；同時(shí)產(chǎn)生酸性代謝產(chǎn)物、內(nèi)毒素、過(guò)氧化產(chǎn)物及炎 性介質(zhì)等有害物質(zhì)，引起氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致腎臟發(fā)生急性功能損害。 該制模方法可用于模擬遠(yuǎn)端器官損傷導(dǎo)致 ARF 的病理生理狀態(tài)，但肝、腸等器官缺血損傷可引發(fā)多器官功能障礙，腎損傷程度無(wú)法準(zhǔn)確把控，故實(shí)際操作具有一定難度。 4、藥物注射法 4.1 油酸注射法 油酸是一種具有較強(qiáng)毒性作用的脂肪酸，進(jìn)入機(jī)體組織后可形成脂肪栓塞，引起腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞腫脹、退變，導(dǎo)致腎血管內(nèi)徑縮小，血流阻力增大，腎組織血流灌注不足，微循環(huán)障礙，腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞缺血缺氧，引起 AKI。 方法舉例： 麻醉 Wistar 大鼠后行腹部正中切口，分離左腎動(dòng)脈，經(jīng)左腎動(dòng)脈注射 0.15 mL/kg 油酸，發(fā)現(xiàn)注射油酸 10 min、6 h、24 h 腎組織明顯缺血，腎內(nèi)小動(dòng)脈收縮，血管內(nèi)皮損傷，腎小管壞死，血漿 BUN、SCr 升高，脂肪栓塞，提示制模成功。 該制模方法操作簡(jiǎn)單，病程穩(wěn)定，腎組織結(jié)構(gòu)改變隨注射油酸劑量和時(shí)間不同而變化，便于動(dòng)態(tài)觀察，適用于腎微循環(huán)研究，也可用于模擬起源于腎微循環(huán)障礙的缺血性 AKI，但油酸具有較強(qiáng)毒性，對(duì)機(jī)體損害較大，易并發(fā)其他器官損害，不利于臨床藥物篩選研究，使用較少。 4.2 去甲腎上腺素（NE）注射法 NE可引起腎血管收縮，腎小球血流量減少，腎實(shí)質(zhì)缺血缺氧，導(dǎo)致 GFR 降低，引起缺血性 AKI。由于灌注不足，導(dǎo)致腎組織缺血缺氧，進(jìn)一步加重腎損傷。 制模方法舉例： 選取雄性健康犬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)前充分禁食高蛋白飲食；麻醉后，從一側(cè)腎動(dòng)脈以0.75 μg·kg-1·min-1 的速度連續(xù)滴注 NE 40 min 引起腎血流量急劇下降，同側(cè)輸尿管收集的尿量相應(yīng)減少，連續(xù)檢測(cè)提示 SCr、BUN 升高，CCr、GFR 下降，近曲小管廣泛壞死，腎小管上皮細(xì)胞變扁平，提示制模成功。 該制模方法動(dòng)物模型病程穩(wěn)定，成功率高，并且易于采血，能連續(xù)進(jìn)行血液指標(biāo)檢測(cè)，動(dòng)態(tài)了解藥物作用時(shí)間與特點(diǎn)，但費(fèi)用較高，并要并要求研究者熟練掌握手術(shù)操作，主要用于較大的動(dòng)物模型。 5、擠壓法 擠壓法是一種物理制模方法，利用局部放血擠壓制備缺血性 AKI 模型。制模方法。 制模方法舉例： 動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)前 3 d 禁食鹽，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日早晨禁食，實(shí)驗(yàn)前放血 8 mL/kg；實(shí)驗(yàn)中取俯臥位，根據(jù)體重選取不同壓力，持續(xù)擠壓雙后肢 5 h；擠壓后 1～3 d血漿 BUN、SCr 均明顯上升，尿量、CCr 及 GFR 等均明顯下降，提示制模成功。家兔經(jīng)禁食、放血和擠壓處理后，被擠壓組織形成局部水腫，導(dǎo)致全身血容量不足，腎臟血流灌注不足，腎實(shí)質(zhì)缺血缺氧，超微結(jié)構(gòu)改變，腎臟毛細(xì)血管腔狹窄，進(jìn)而引起腎小球?yàn)V過(guò)功能下降，造成缺血性 AKI。 該制模方法屬于單一因素，可通過(guò)觀察腎小球超微結(jié)構(gòu)及血液流變學(xué)變化研究缺血性 AKI的發(fā)病機(jī)制，但動(dòng)物存在個(gè)體差異，穩(wěn)定性差，難以建立典型的 AKI 動(dòng)物模型，現(xiàn)階段應(yīng)用較少。 二、藥物誘導(dǎo)模型 藥物引發(fā)的腎毒性、急性細(xì)菌感染造成腎臟細(xì)胞損傷、橫紋肌溶解所致AKI。 1、阿霉素致大鼠、小鼠 AKI 模型 阿霉素也叫多柔比星，是目前公認(rèn)的能夠較好模擬人類 AKI 的模型之一，其致病機(jī)制主要包括 3 個(gè)方面。 ① 阿霉素的細(xì)胞毒素的釋放: 阿霉素作用于腎臟時(shí)產(chǎn)生的細(xì)胞毒作用較強(qiáng)，細(xì)胞毒在腎臟細(xì)胞中釋放，導(dǎo)致足細(xì)胞形態(tài)改變、足細(xì)胞標(biāo)志物裂隙素分布發(fā)生變動(dòng)、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)異常。 ② 阿霉素導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化: 阿霉素中含有醌式結(jié)構(gòu)，醌式結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的活性氧會(huì)使腎臟細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化，破壞腎小球?yàn)V膜的完整性，大量蛋白漏出，產(chǎn)生蛋白尿。 ③ 阿霉素導(dǎo)致炎癥發(fā)生: 阿霉素可刺激多種細(xì)胞因子及炎性介質(zhì)活性增加，腎小球系膜細(xì)胞發(fā)生病變，其數(shù)量及基質(zhì)增多，病程逐漸發(fā)展，最終形成腎小球硬化。 結(jié)合了國(guó)內(nèi)外研究中的多種造模方式，改變阿霉素尾靜脈注射的給藥劑量和次數(shù)，最終確定造模的最佳條件為間隔1周2次重復(fù)注射阿霉素，分次給藥累加劑量為7．5mg/kg時(shí)，模型效果最佳。據(jù)觀察，此種給藥方式可以通過(guò)減少阿霉素劑量，減少其他臟器負(fù)擔(dān)，并且可以保證大鼠持續(xù)受到低劑量阿霉素刺激，腎毒性加重。 這種建模方法既降低了模型動(dòng)物的死亡率，又可使模型狀態(tài)穩(wěn)定，對(duì)長(zhǎng)期的試驗(yàn)研究有很大幫助。 2、順鉑致小鼠及非嚙齒動(dòng)物 AKI 模型 在目前的研究中，順鉑導(dǎo)致的腎損傷機(jī)制主要有炎性損傷、氧化應(yīng)激、壞死及凋亡、自噬等多種途徑。 此種方法為推薦造模方式，但經(jīng)機(jī)體代謝產(chǎn)生的鉑離子如何在腎臟組織中發(fā)揮作用仍然需要進(jìn)一步研究。大鼠、小鼠等嚙齒動(dòng)物與人類在遺傳學(xué)、體型、行為、壽命等方面存在明顯差異，在嚙齒動(dòng)物身上建立的疾病模型有時(shí)不能很好地模擬人類疾病的過(guò)程; 但非嚙齒動(dòng)物，如迷你豬，在遺傳學(xué)、機(jī)體構(gòu)造和生理學(xué)方面均與人類相似，所以從動(dòng)物模型建立的角度來(lái)看，迷你豬比嚙齒動(dòng)物模型更具優(yōu)勢(shì)。 研究表明應(yīng)用順鉑誘導(dǎo)迷你豬AKI建模，單次靜脈注射 3．8mg/kg順鉑，4 d 后便出現(xiàn)明顯 AKI 特征。 此種方式建模速度快、可行性高，也進(jìn)一步驗(yàn)證了順鉑作用于非嚙齒動(dòng)物建模的可行性。 3、脂多糖致大鼠、小鼠 AKI 模型 脂多糖為革蘭陰性菌內(nèi)毒素的主要成分，當(dāng)革蘭陰性細(xì)菌刺激機(jī)體發(fā)生免疫反應(yīng)、導(dǎo)致機(jī)體損傷時(shí)，脂多糖是重要致病因素之一。脂多糖進(jìn)入機(jī)體后可產(chǎn)生膿毒血癥，膿毒血癥會(huì)引起腎臟發(fā)生急性損傷，同時(shí)導(dǎo)致全身多器官衰竭，這也是膿毒血癥發(fā)病中常見(jiàn)的致死原因。 機(jī)體感染革蘭陰性菌時(shí)產(chǎn)生多種炎癥因子，如白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-6 和腫瘤壞死因子-α等，產(chǎn)生過(guò)多或活性增加均可導(dǎo)致腎臟損傷，腎功能發(fā)生改變，最后在一系列的病理生理學(xué)反應(yīng)后，導(dǎo)致 AKI。脂多糖既能直接造成腎損傷，也可以間接的破壞腎臟細(xì)胞，最終導(dǎo)致腎臟細(xì)胞壞死，在AKI 的發(fā)展中起到重要作用。 發(fā)病機(jī)制分別為腎小管上皮細(xì)胞線粒體功能受損、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)以及腎臟微循環(huán)障礙等。 比較了脂多糖、甘油、順鉑、阿霉素四種藥物誘導(dǎo) AKI 的區(qū)別。研究表明，在脂多糖誘導(dǎo)的 AKI 腎組織中，可見(jiàn)腎間質(zhì)充血及炎性細(xì)胞增多，腎小管在不同程度上受損，上皮細(xì)胞由于壞死產(chǎn)生脫落，但沒(méi)有甘油和慶大霉素所致腎小管損傷明顯。 4、甘油致大鼠 AKI 模型 甘油是一種高滲性物質(zhì)，使用甘油進(jìn)行肌肉注射后，機(jī)體會(huì)因局部肌肉壞死以及局部紅細(xì)胞溶解，造成橫紋肌溶解( rhabdomyolysis，ＲM) 。肌紅蛋白和血紅蛋白屬于小分子量物質(zhì)，會(huì)比其他物質(zhì)更容易通過(guò)腎小球進(jìn)入腎小管，對(duì)腎小管造成破壞，最終導(dǎo)致急性腎小管壞死。 研究表明通過(guò)肌內(nèi)注射 50% 甘油( 10 mL/kg) 建立ＲM致AKI大鼠模型，當(dāng)甘油對(duì)其誘導(dǎo) 24 h 時(shí)后，腎臟組織學(xué)發(fā)生的變化最為明顯，具體表現(xiàn)為雙腎明顯變大，腎臟表面有出血點(diǎn)，腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生不同程度的脫落，甚至出現(xiàn)凋亡及壞死現(xiàn)象，脫落的上皮細(xì)胞在近曲小管和遠(yuǎn)曲小管附近聚集，伴有大量蛋白管型。 使用甘油進(jìn)行動(dòng)物建模是研究ＲM 所致 AKI 發(fā)病機(jī)制的一種比較成熟的方法。該模型的特點(diǎn)是肌紅蛋白釋放增多、腎小管梗阻和腎血管狹窄。最常見(jiàn)的給藥方法是肌肉注射。 在疾病動(dòng)物模型的研究中，應(yīng)明確研究目的，結(jié)合適用性和實(shí)用性兩個(gè)方面進(jìn)行考慮，謹(jǐn)慎選擇相應(yīng)模型 |
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2024-03-18 15:13
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angleljl(金幣+1): 謝謝參與
2024-03-19 07:05
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nono20094樓
2024-03-19 12:56
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·
2024-03-19 14:31
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2024-03-19 16:36
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tzynew7樓
2024-03-19 19:34
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假大空8樓
2024-03-21 12:46
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2024-09-25 11:57
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tzynew10樓
2024-09-25 15:20
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通訊作者寫(xiě)誰(shuí)，問(wèn)題是你意想不到的問(wèn)題
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