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流式抗體（熒光抗體）細(xì)胞染色步驟與注意
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染色緩沖液（BSA）的配制： PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱備用。 準(zhǔn)備單細(xì)胞懸液：淋巴組織、骨髓、血液或培養(yǎng)的細(xì)胞。 用冰染色緩沖液洗細(xì)胞2次，離心細(xì)胞，用冰染色緩沖液重懸細(xì)胞，使終濃度為2×107細(xì)胞/ml。 各取50ul（106細(xì)胞）細(xì)胞懸液到2個(gè)圓底的Ep管中。 根據(jù)抗體說明書在其中1個(gè)Ep管中加入合適的抗體量，另外1個(gè)加入同型對照抗體，冰上避光孵育20分鐘（建議每5分鐘輕輕混勻，以免細(xì)胞沉積）。根據(jù)熒光抗體的親和力適當(dāng)延長染色時(shí)間。 用1ml染色緩沖液洗2次去除未結(jié)合的抗體，300×g離心5分鐘，每次離心后小心吸取上清。 用適量染色緩沖液（如500ul）重懸細(xì)胞。 流式細(xì)胞儀分析染色結(jié)果（不超過4小時(shí)）。如果暫時(shí)無法檢測，也可以將染色后的細(xì)胞用4%多聚甲醛固定后，避光儲(chǔ)存在4度。固定后的細(xì)胞可以保存zui多一個(gè)星期。 公眾號：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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