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DNA提取試劑盒與苯酚氯仿提取DNA法的異同 已有1人參與
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酚－氯仿方法是提取核酸的經(jīng)典方法，主要原理是利用核酸、蛋白等雜質(zhì)在水相和有機(jī)相中溶解度不同而重新分配。 試劑盒原理是在特定溶液環(huán)境下（高鹽、低pH)使核酸吸附在固相介質(zhì)（一般是硅膠膜）上，洗滌去除雜質(zhì)后，再改變?nèi)芤涵h(huán)境使DNA溶解到純水或TE中。 酚氯仿方法經(jīng)典、便宜，用的都是實(shí)驗(yàn)室常用試劑，提純效率和純度都很高，但缺點(diǎn)是費(fèi)時(shí)費(fèi)力，苯酚和氯仿還有一定毒性，我見過的實(shí)驗(yàn)室很少有用這種方法的。 試劑盒嚴(yán)格來說也分好多種，經(jīng)典的是離心柱的，就是把硅膠膜固定在離心管中，類似于超濾膜，用離心力或者負(fù)壓讓液體通過硅膠膜，核酸就留在膜上。在經(jīng)過洗滌、洗脫的步驟得到核酸。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、時(shí)間短，現(xiàn)在也能達(dá)到很高的質(zhì)量，價(jià)格也不貴。缺點(diǎn)是不易放大，需要多次離心。 試劑盒基本步驟是先使樣本裂解，在特定溶液中通過離心流過硅膠膜，再經(jīng)過幾次洗滌，最后加上洗脫液，離心后核酸就溶解到洗脫液中。具體的你可以根據(jù)你自己的需要到網(wǎng)上查一下說明書，現(xiàn)在做試劑盒公司的很多，步驟大同小異。 試劑盒也不是一定很便宜，對(duì)一些難度高（病毒核酸、法醫(yī)樣本核酸）或者要求高（去內(nèi)毒素）的用途也比較貴。還有一種磁珠法提取，不需要離心，易于放大，可以用于自動(dòng)化操作。 公眾號(hào)：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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