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結(jié)核分枝桿菌感染實驗室檢查
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結(jié)核分枝桿菌感染實驗室檢查 結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）是經(jīng)典致病菌，引起肺結(jié)核和肺外感染。結(jié)核病是目前全球感染性疾病死亡的主要原因。 結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（Mycobacterium tuberculosis complex，MTBC） 該菌是細(xì)長、直或稍彎曲、兩端圓鈍的桿菌，長約1~4 μm，寬約0.3~0.6 μm，抗酸染色陽性，可致結(jié)核病。結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群包括MTB、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌、卡內(nèi)蒂分枝桿菌和田鼠分枝桿菌等。非結(jié)核分枝桿菌（non-tuberculous mycobacteria，NTM）是指分枝桿菌屬中除結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群及麻風(fēng)分枝桿菌以外的菌種。 涂片顯微鏡檢查 用于涂片顯微鏡檢查的臨床標(biāo)本，包括但不限于呼吸道標(biāo)本（痰、咽喉拭子、支氣管肺泡灌洗液、支氣管毛刷等）、胸腔積液、腹腔積液、尿液、腦脊液、胃液、膿液（分泌物、穿刺液等）、穿刺物、病理組織、糞便等。對于痰標(biāo)本，采用5%次氯酸鈉液化后離心濃縮，沉淀物涂片染色可有效增加陽性率，對于未采用分子生物學(xué)或培養(yǎng)等手段的實驗室非常重要。對于體液標(biāo)本，含有的MTBC的數(shù)量很少，涂片本身價值非常有限，一般推薦濃縮后涂片。但是濃縮過程存在生物安全風(fēng)險，且MTBC的比重與水相近，有一部分MTBC會存在于上清液中，離心未必有效提高檢出率。因此在實驗室有條件時應(yīng)盡可能采用更靈敏的手段進(jìn)行MTBC檢測。目前較為實際的方法是，對肉眼所見清亮的體液標(biāo)本，優(yōu)選細(xì)胞離心甩片機(jī)濃縮制片，也可使用普通離心機(jī)。對于腦脊液，標(biāo)本量充足時建議至少用5 ml標(biāo)本。當(dāng)標(biāo)本混濁、血性或膿性，可直接涂片不離心。濃縮的標(biāo)本在進(jìn)行半定量報告時，建議備注為“濃縮標(biāo)本”。胸腔積液時，優(yōu)選胸腔活檢組織用于MTBC微生物學(xué)檢查。 1.萋-尼抗酸染色和顯微鏡檢查：該方法采用萋-尼抗酸染色液對臨床標(biāo)本涂片染色后，用普通光學(xué)顯微鏡或發(fā)光二極管顯微鏡進(jìn)行觀察。 2.熒光染色和顯微鏡檢查：該方法利用金胺“O”染料對抗酸桿菌進(jìn)行染色。該方法閱片時間較短，一般為1~3 min，可減輕工作強(qiáng)度。熒光染色后的標(biāo)本要立即觀察，否則應(yīng)將玻片標(biāo)本置于2~8 ℃黑暗中以減少淬滅對結(jié)果的影響。結(jié)果分級報告標(biāo)準(zhǔn)見表1。 涂片鏡檢具有操作簡單、檢測迅速、對硬件設(shè)施要求不高等優(yōu)點。 涂片鏡檢的缺點包括：不能區(qū)分菌體的死活，無法開展后續(xù)的藥物敏感性試驗；只能檢測標(biāo)本中是否存在分枝桿菌，不能區(qū)分MTB和NTM，檢測結(jié)果陽性還需進(jìn)一步明確。我國“MTB分離株”中最后鑒定為NTM的比例約22.9%。很多NTM可呈現(xiàn)一定程度的抗酸性，其他如紅球菌屬、諾卡菌屬、米克戴德軍團(tuán)菌、隱孢子蟲屬的包囊、等孢子蟲、環(huán)孢子蟲和微孢子菌屬孢子，也有某些程度的抗酸性。≤10%的快生長分枝桿菌有抗酸性但不被熒光素著色。因此，對于有肺結(jié)核癥狀和體征的患者，建議采用快速分子生物學(xué)方法（如Xpert MTB/RIF等）作為涂片的替代方法用于結(jié)核病及耐藥結(jié)核病患者病原學(xué)檢查的首選方法。 |
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