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細(xì)胞消化的小技巧
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不一定要一次把所有細(xì)胞都要消化下來！ 晃動培養(yǎng)盤并在顯微鏡下用肉眼觀察，只要70~80%細(xì)胞都收縮了或超過適合消化時間，就該終止消化反應(yīng)，如果細(xì)胞量夠即可進(jìn)行后續(xù)傳代或?qū)嶒?yàn)步驟；如果細(xì)胞量不夠，則可視情況用不含鈣、鎂離子的平衡鹽溶液清洗仍貼壁的細(xì)胞，再進(jìn)行一次消化反應(yīng)。 ▲ 消化不下來的細(xì)胞（黃）請視情況決定是否再消化一次。 不一定要吹打成完全單細(xì)胞懸液！ 一般細(xì)胞脫離培養(yǎng)底物、并經(jīng)過5~10次輕柔吹打后，會在細(xì)胞懸液里形成小規(guī)模聚集(約5~10顆細(xì)胞)，所以不需要過度延長消化時間想讓細(xì)胞完全分離成單細(xì)胞懸液。 消化效果不佳，先提升消化液濃度、再加長作用時間！ 當(dāng)你選定了一種消化方式 (物理機(jī)械法除外)，發(fā)現(xiàn)效果不佳，首先應(yīng)考慮提高EDTA或胰酶濃度，效果再不佳才加長消化的作用時間，避免細(xì)胞長時間浸泡在消化液中造成的細(xì)胞膜損傷。 （一般消化液使用：0.02%~0.04% EDTA作用5-20分鐘；0.2~0.5% 胰蛋白酶作用1~5分鐘） 結(jié)語 細(xì)胞消化 ，是一個看似很簡單，但是有很多技術(shù)含量的步驟。消化好壞、是否污染、有無受傷，都在這短短的五六分鐘里決定。 當(dāng)我們已經(jīng)可以順利操作細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，接下來要思考的，就是如何讓細(xì)胞長得更健康、更均一、做出來的實(shí)驗(yàn)才會更完美。 祝各位的細(xì)胞都顆顆透亮、粒粒分明、活力旺盛！ 公眾號：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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