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科研戰(zhàn)神·王鐵蟲 (小有名氣)
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實驗干貨 | 結核分枝桿菌感染實驗室檢查
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實驗干貨 | 結核分枝桿菌感染實驗室檢查 結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）是經(jīng)典致病菌，引起肺結核和肺外感染。結核病是目前全球感染性疾病死亡的主要原因。 結核分枝桿菌復合群（Mycobacterium tuberculosis complex，MTBC） 該菌是細長、直或稍彎曲、兩端圓鈍的桿菌，長約1~4 μm，寬約0.3~0.6 μm，抗酸染色陽性，可致結核病。結核分枝桿菌復合群包括MTB、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌、卡內(nèi)蒂分枝桿菌和田鼠分枝桿菌等。非結核分枝桿菌（non-tuberculous mycobacteria，NTM）是指分枝桿菌屬中除結核分枝桿菌復合群及麻風分枝桿菌以外的菌種。 涂片顯微鏡檢查 用于涂片顯微鏡檢查的臨床標本，包括但不限于呼吸道標本（痰、咽喉拭子、支氣管肺泡灌洗液、支氣管毛刷等）、胸腔積液、腹腔積液、尿液、腦脊液、胃液、膿液（分泌物、穿刺液等）、穿刺物、病理組織、糞便等。對于痰標本，采用5%次氯酸鈉液化后離心濃縮，沉淀物涂片染色可有效增加陽性率，對于未采用分子生物學或培養(yǎng)等手段的實驗室非常重要。對于體液標本，含有的MTBC的數(shù)量很少，涂片本身價值非常有限，一般推薦濃縮后涂片。但是濃縮過程存在生物安全風險，且MTBC的比重與水相近，有一部分MTBC會存在于上清液中，離心未必有效提高檢出率。因此在實驗室有條件時應盡可能采用更靈敏的手段進行MTBC檢測。目前較為實際的方法是，對肉眼所見清亮的體液標本，優(yōu)選細胞離心甩片機濃縮制片，也可使用普通離心機。對于腦脊液，標本量充足時建議至少用5 ml標本。當標本混濁、血性或膿性，可直接涂片不離心。濃縮的標本在進行半定量報告時，建議備注為“濃縮標本”。胸腔積液時，優(yōu)選胸腔活檢組織用于MTBC微生物學檢查。 1.萋-尼抗酸染色和顯微鏡檢查：該方法采用萋-尼抗酸染色液對臨床標本涂片染色后，用普通光學顯微鏡或發(fā)光二極管顯微鏡進行觀察。 2.熒光染色和顯微鏡檢查：該方法利用金胺“O”染料對抗酸桿菌進行染色。該方法閱片時間較短，一般為1~3 min，可減輕工作強度。熒光染色后的標本要立即觀察，否則應將玻片標本置于2~8 ℃黑暗中以減少淬滅對結果的影響。結果分級報告標準見表1。 涂片鏡檢具有操作簡單、檢測迅速、對硬件設施要求不高等優(yōu)點。 涂片鏡檢的缺點包括：不能區(qū)分菌體的死活，無法開展后續(xù)的藥物敏感性試驗；只能檢測標本中是否存在分枝桿菌，不能區(qū)分MTB和NTM，檢測結果陽性還需進一步明確。我國“MTB分離株”中最后鑒定為NTM的比例約22.9%。很多NTM可呈現(xiàn)一定程度的抗酸性，其他如紅球菌屬、諾卡菌屬、米克戴德軍團菌、隱孢子蟲屬的包囊、等孢子蟲、環(huán)孢子蟲和微孢子菌屬孢子，也有某些程度的抗酸性。≤10%的快生長分枝桿菌有抗酸性但不被熒光素著色。因此，對于有肺結核癥狀和體征的患者，建議采用快速分子生物學方法（如Xpert MTB/RIF等）作為涂片的替代方法用于結核病及耐藥結核病患者病原學檢查的首選方法。 |
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