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科研戰(zhàn)神·王鐵蟲 (小有名氣)
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手把手教你乳腺增生動物模型
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手把手教你乳腺增生動物模型 乳腺增生（Mammary Gland Hyperplasia，MGH）常見于25-40歲的中青年婦女，隨著生活節(jié)奏加快、社會壓力增大及受生育率下降的影響，其發(fā)病率逐年增高且占乳房疾病的75%。由不良精神刺激等因素引發(fā)，導(dǎo)致內(nèi)分泌功能紊亂，雌孕激素比例失衡。在藥物治療上，最常用他莫昔芬，但副作用大，長期服用易致月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)等不良反應(yīng)。 一、動物的選擇 主要為大、小鼠、家兔、豚鼠等。現(xiàn)以大鼠、小鼠、家兔更為常用。 二、造模方法 1、雌二醇與黃體酮制備大（�。┦蟆⒓彝萌橄僭錾Ｐ� 1.1原理 內(nèi)分泌及卵巢相關(guān)功能出現(xiàn)失調(diào)。雌激素與孕激素長期刺激乳腺組織，使其不能由增殖轉(zhuǎn)入復(fù)舊，從而誘導(dǎo)乳腺組織增生。 1.2方法 ①雌性未孕SD大鼠，體重190～200g，大鼠按劑量-0.5mg·kg-1·d-1肌內(nèi)注射苯甲酸雌二醇; 給藥25d后按劑量4mg·kg-1·d-1肌內(nèi)注射黃體酮，共計5d。于第31天可成功制備大鼠乳腺增生模型。該模型可維持不少于40d。 ②雌性未孕大鼠，體重220～250g，大鼠按劑量0.25mg·kg-1·d-1腹腔注射苯甲酸雌二醇，共計15次; 按劑量4mg·kg-1·d-1腹腔注射黃體酮，共計5d。第36天，可制備大鼠乳腺增生模型。該模型可維持不少于40d。 ③雌性小鼠，體重18～22g，小鼠按劑量0.5mg·kg-1·d-1腹腔注射苯甲酸雌二醇，共計25d; 隨 后按劑量4mg·kg-1·d-1肌內(nèi)注射黃體酮，共計5d。第31天可制備小鼠乳腺增生模型。該模型持續(xù)不少于40d。 ④未孕雌性新西蘭白兔，體重2.0～2.5kg，家兔按劑量0.5mg·kg-1肌注苯甲酸雌二醇，每天1次，連續(xù)25d; 隨后按劑量1mg·kg-1肌注黃體酮，隔天1次，共3次。于第31天可制備家兔乳腺增生模型。該模型持續(xù)不少于2周。 2、雌激素與孕激素聯(lián)用 + 激怒刺激制備大鼠肝郁型乳腺增生模型 2.1原理 雌激素和孕激素聯(lián)用可致大鼠乳腺增生，激怒可致大鼠出現(xiàn)肝郁，兩者結(jié)合，可形成肝郁型乳腺增生模型。 2.2方法 6月齡大鼠，雌性，大鼠按劑量0.5mg·kg-1·d-1肌內(nèi)注射苯甲酸雌二醇，連續(xù)25d; 隨后肌內(nèi)注射黃體酮（4mg·kg-1·d-1），共計5d。在第1次造模的同時，用鼠夾夾尾，激怒大鼠，刺激持續(xù)30min，每天1次，連續(xù)30d。于第35天可成功制備大鼠肝郁型乳腺增生模型。該模型持續(xù)不少于2周。 3、二甲基苯蒽（DMBA）+ 頸部佩帶枷具制備大鼠肝郁血瘀型乳腺非典型增生模型 3.1原理 DMBA可使大鼠乳腺組織的終末芽體不是向腺泡芽體分化，而是呈現(xiàn)導(dǎo)管內(nèi)增生。頸部佩帶枷具可致大鼠出現(xiàn)神情癡呆、郁郁寡歡、反應(yīng)遲鈍、不愛運動，繼而出現(xiàn)肝郁血瘀癥狀。兩者結(jié)合，形成肝郁血瘀型乳腺非典型增生模型。 3.2方法 未育SD雌性大鼠，鼠齡為出生后40d左右。于造模第1天，按劑量100mg·kg-1一次性灌服DMBA，制作大鼠乳腺非典型增生模型。大鼠正常喂飼，于第1周大鼠頸部佩帶枷具（選取直徑4.5mm軟硬適中的膠皮套鐵絲制成枷鎖，從一側(cè)腋下環(huán)繞至頸部呈斜跨式，每24h左右交替佩戴，使之有束縛感，確保長時間佩戴并不傷皮毛），共8周。于第55天，制備肝郁血瘀型乳腺非典型增生模型。該模型持續(xù)不少于2周。 三、模型指標(biāo) 1、病理學(xué)標(biāo)：乳腺增生模型制備成功后乳腺組織會出現(xiàn)明顯增生，乳腺小葉體積增大，乳腺小葉中腺泡及小導(dǎo)管出現(xiàn)擴(kuò)張，小導(dǎo)管及小葉內(nèi)腺泡數(shù)增多，互相靠近至融合; 腺泡的上皮細(xì)胞數(shù)目增多; 毛囊鞘根細(xì)胞中度增生，皮膚基底細(xì)胞增生成團(tuán)塊狀，皮脂腺數(shù)增多。病理指標(biāo)是乳腺增生的最直觀證據(jù)，是乳腺增生模型成功與否的核心指標(biāo)。權(quán)重系數(shù)設(shè)定為0.4。 2、表觀指標(biāo)：乳腺增生慢性的表觀指標(biāo)有大鼠第2或3對乳頭豎起較堅實，有乳暈，乳頭直徑和高度顯著增大，乳頭豎起充血; 在第3周達(dá)腫脹高峰，第4周腫脹度持平，在第5周開始下降。動物易怒、易躁動。表觀指標(biāo)在乳腺增生疾病臨床診斷中具有重要地位，是乳腺增生模型成功與否的直接相關(guān)指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)設(shè)定為0.3。 3、生化指標(biāo)：多數(shù)乳腺增生造模成功后機(jī)體生化指標(biāo)也會發(fā)生相應(yīng)變化，如血清促性腺激素釋放激素（Gn-ＲH），促卵泡激素（FSH），催乳素（PＲL），雌二醇（E2），5-羥色胺（5-HT）水平增加，血清孕酮（P）含量減少; 乳腺組織雌激素受體（EＲ），孕激素受體（PＲ）的蛋白表達(dá)量顯著增加等。必要時加測血液流變學(xué)指標(biāo)。生化指標(biāo)是乳腺增生模型發(fā)生、發(fā)展、恢復(fù)過程的機(jī)體反映，檢測指標(biāo)多，是模型成功與否的間接相關(guān)指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)設(shè)定為0.3。 |
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