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科研戰(zhàn)神·王鐵蟲 (小有名氣)
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手把手教你功能性消化不良動物模型構(gòu)建
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手把手教你功能性消化不良動物模型構(gòu)建 功能性消化不良是消化科最常見的一種非器質(zhì)性胃腸病，百姓口中所說“消化不良”多指此病，其可占消化科門診人數(shù)的40％～50％。臨床表現(xiàn)包括進餐后不久即出現(xiàn)飽腹感，上腹脹痛，燒灼感，通常還伴有打嗝、反酸等癥狀，而部分患者情緒還可能存在焦慮及抑郁的表現(xiàn)。該病在全球范圍內(nèi)的總患病率為11.5%～14.5%，而在我國的患病率約為23.5%。由于此病難以用器質(zhì)性病變解釋相關(guān)癥狀，且臨床病因及發(fā)病機制尚未完全明確，因此為臨床治療帶來一定困難。所以建立合適的動物模型迫在眉睫。 一、動物的選擇 大鼠是比較常選擇的實驗動物。 二、造模方法 1、碘乙酰胺灌胃法 碘乙酰胺灌胃法是目前國際上較為公認的FD造模方法。 造模方法：SD大鼠7d起, 給予0.1%碘乙酰胺與2%蔗糖的混合液0.2mL灌胃, 1次/d, 持續(xù)6d, 后正常飼養(yǎng), 至大鼠8-10wk時造模完成。 評價：碘乙酰胺灌胃造模法已成為國際公認的方法，較好地模擬了胃敏感性升高、順應(yīng)性降低等病理表現(xiàn)。通過應(yīng)用恒壓器進行模型評價, 也是相對客觀的評價方法。 2、夾尾應(yīng)激法 “夾尾刺激法”是目前國內(nèi)應(yīng)用最多的FD造模方法。 造模方法：用長海綿鉗夾大鼠尾巴遠端1/3處, 以不破皮為度, 令其暴怒并與同籠其他大鼠廝打, 每次刺激30min, 每隔3h刺激1次, 4次/d, 連續(xù)7d結(jié)束。為避免因抓傷引起感染, 每次造模結(jié)束后用0.5%的碘伏涂擦大鼠受傷部位。7d后出現(xiàn)進食量減少, 胃排空率降低, 且可見動物緊張易怒, 體形漸瘦, 溏便, 毛發(fā)枯黃, 暗啞毛糙。 改良后的造模方法：研究者在上述模型基礎(chǔ)上進行改良, 將夾尾次數(shù)調(diào)整為2次/d, 夾尾時間為30 min/次, 總共刺激時間延長至3wk。 評價：相對于持續(xù)1wk的郭氏夾尾刺激法, 改良后的3wk夾尾刺激法更加符合FD的慢性發(fā)病過程。 三、張氏不規(guī)則喂養(yǎng)及飲用酸化水法 造模方法：選取健康成年Wistar大鼠，按自行設(shè)計的不規(guī)則喂養(yǎng)方法飼養(yǎng)4周，其中實驗組動物單日正常進食、雙日禁食，自由飲水，并在水中加入鹽酸(每100ml水加10N鹽酸1ml) 以破壞胃內(nèi)酸堿平衡。 觀察實驗組動物，90%出現(xiàn)胃電節(jié)律失常，異常節(jié)律指數(shù)達36.67%，且無明顯器質(zhì)性病變，證實造模成功。該方法可用于FD中脾氣虛弱證型模型的制作。 四、不規(guī)則喂養(yǎng)及飲用酸化水法的改良法 主要存在三種方法。 1、不規(guī)則喂養(yǎng)聯(lián)合酸化水法，并在此基礎(chǔ)上附加第三種方法進行聯(lián)合造模。 造模方法：在不規(guī)則進食、飲用酸化水的基礎(chǔ)上，聯(lián)合勞倦過度法進行FD大鼠脾胃虛弱型的動物模型制造，其中勞倦過度法采用游泳消耗體力法，即在22℃水溫中令動物游泳至連續(xù)“冒泡”5次終止，每日2次，間隔5h，連續(xù)造模2周。觀察模型組出現(xiàn)體重下降、飲食減少、大便軟溏、毛發(fā)枯亂、活動減少等表現(xiàn)，證明造模成功。 2、單獨選用不規(guī)則喂養(yǎng)法聯(lián)合應(yīng)用他法進行造模。 造模方法：采用在不規(guī)則喂養(yǎng)的同時加入超聲波噪音刺激的方法制作FD小鼠模型，具體方法為單日進食、雙日禁食，于每日(8:00－20:00)將超聲波清洗機放置鼠籠附近，每2h進行1次噪音干擾，每次噪音刺激持續(xù)30min，并以每籠中至少有1只小鼠出現(xiàn)撕咬等激惹表現(xiàn)為度，造模期間自由飲水，持續(xù)造模14d。 觀察模型組小鼠進食量與體質(zhì)量明顯下降、胃內(nèi)殘留率升高、小腸推進率降低(與正常組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義) ，證明造模成功。 3、單獨選用飲用酸化水法或改良酸化水法。 造模方法：采用鹽酸灌胃的方法制造胃虛飲停型FD大鼠的動物模型，具體方法為給予模型組大鼠溫度為0℃、濃度為0.5mol/L鹽酸(用量按0.8ml/100g) 灌胃，而正常組大鼠給予常溫下的自來水(用量按0.8ml/100g) 灌胃，每日進行1次，造模2周。 |
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