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科研戰(zhàn)神·王鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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吐溫20在WB中的作用是什么？
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Western blot的洗液TBST是實(shí)驗(yàn)室常用的配制液體，對(duì)于TBST的配方也基本上相差不多，其中配方中就有一種組分是Tween-20，一種黃色或琥珀色澄明的油狀液體，具有特殊的臭氣和微弱苦味。用移液槍吸取時(shí)會(huì)有一種滯后感。為什么在Western blot的洗液TBST中要加入這么一種試劑，Tween-20在Western blot 中在發(fā)揮什么樣的作用呢？ 1、Tween-20 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也寫(xiě)作Tween 20，也稱Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名為吐溫-20或吐溫20。Tween-20為黃色或琥珀色澄明的油狀液體，具有特殊的臭氣和微弱苦味。分子中含有較多的親水性基團(tuán)，可與水、甲醇、乙醇、異丙醇、丙二醇、乙二醇、棉子油等混溶。是常用的非離子性去垢劑。 2、Tween-20的應(yīng)用 Tween-20是一種非離子型表面活性劑。用途為水包油乳化劑、可用作溶劑、擴(kuò)散劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)滑劑和抗靜電劑等。氣相色譜固定液(最高使用溫度120℃)分離分析揮發(fā)油、脂肪酸酯、醇、酮和鹵化物。 3、Tween-20作用 Western blot的操作流程中大部分都用到TBST洗液，而且還是封閉，一抗二抗孵育這種比較關(guān)鍵的步驟。通常Tween-20作為一種非離子型表面活性劑，效果和SDS、BSA作用差不多，主要是封閉膜上蛋白的非結(jié)合位點(diǎn)，以降低背景，增強(qiáng)抗體的特異性結(jié)合。理想的封閉劑應(yīng)該封閉所有未結(jié)合位點(diǎn)而不替換膜上的靶蛋白、不結(jié)合靶蛋白的表位、也不與抗體或檢測(cè)試劑有交叉反應(yīng)。如果脫脂牛奶封閉效果不好可以提高吐溫濃度。 在WB洗液里的吐溫是和BSA一樣，對(duì)抗原抗體蛋白提供保護(hù)作用，同時(shí)因?yàn)槭潜砻婊钚詣ㄋ颈P加成親水的環(huán)氧乙烷基團(tuán)后的化合物），可以減少抗體對(duì)抗原的非特異性作用，用于洗脫未結(jié)合的抗體、減少非特異性結(jié)合。Tween-20是我們用TBST的時(shí)候Tween-20得用量是0.5ml/L，不加SDS。 |
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