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科研戰(zhàn)神·王鐵蟲 (小有名氣)
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PCR新手必看：區(qū)分各種PCR 已有1人參與
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PCR新手必看：Sample Text 最近學(xué)習(xí)定量PCR和數(shù)字PCR，然后就遇到各種PCR技術(shù)，PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR和ddPCR，有幾個(gè)長(zhǎng)得好像，怎么區(qū)分呢？今天一舉搞定它。 01、普通PCR PCR是普通PCR，以雙鏈DNA為模板，以dNTP為底物，特異性地?cái)U(kuò)增雙鏈DNA。然后采用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，只能做定性分析。 02、實(shí)時(shí)熒光定量PCR qPCR和Real-time PCR是實(shí)時(shí)熒光定量PCR，以cDNA為模板，以dNTP為底物，對(duì)擴(kuò)增出的DNA進(jìn)行定量分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR常用的方法：水解探針?lè)ê蜔晒馊玖戏ā?br /> 03、逆轉(zhuǎn)錄PCR RT-PCR 是逆轉(zhuǎn)錄PCR，采用 Oligo（dT） 或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，再以 cDNA 為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，結(jié)果只能定性，不能定量。 04、實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR RT-qPCR是實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR，是qPCR+RT-PCR的組合，將總RNA或mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后再作為模板，以dNTP為底物，進(jìn)行qPCR的定量分析。 05、數(shù)字PCR dPCR是數(shù)字PCR即三代PCR，是一種能夠?qū)崿F(xiàn)核酸絕對(duì)定量的精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)，基于泊松分布原理將核酸樣品分配到大量獨(dú)立、平行的微反應(yīng)單元（納升級(jí)）中，使每個(gè)反應(yīng)室中平均只有一個(gè)拷貝或者沒(méi)有目標(biāo)DNA分子，然后加入熒光信號(hào)進(jìn)行擴(kuò)增，從而實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)核酸分子的絕對(duì)計(jì)數(shù)，提高檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度。 各種PCR的全稱 ① 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR） ②實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR） ③ 逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR） ④實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（Real-time RT-PCR，RT-qPCR） 數(shù)字PCR（Digital PCR，Dig-PCR，dPCR） |
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085600 材料與化工 295 求調(diào)劑
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