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科研小努力新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
膜性腎病小鼠模型構(gòu)建
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膜性腎�。╩embranous nephropathy，MN）是臨床上常見(jiàn)的成人腎病綜合征病理類(lèi)型之一，好發(fā)于中老年人，是引起成人腎病 綜合征的最常見(jiàn)的病因，以腎小球基膜上皮細(xì)胞側(cè) 出現(xiàn)含免疫球蛋白的電子致密沉積物伴腎小球毛細(xì) 血管壁彌漫增厚為特點(diǎn)的腎臟疾病。 研究該疾病模型最常用的是Heymann大鼠腎炎模型，但不能成功地應(yīng)用在小鼠，且人體內(nèi)并不存在megalin抗原復(fù)合物。今天小助手給寶子們梳理一下通過(guò)給小鼠尾靜脈注射C-BSA制備膜性腎病動(dòng)物模型，綜合臨床檢查和病理檢查建立全面的小鼠膜性腎病的鑒定方法。 一、動(dòng)物的選擇 6周齡，健康成年雄性BALB/c小鼠。 二、造模方法 小鼠給予0.2mg C-BSA和等體積的弗氏完全佐劑充分乳化成乳白色懸液，多點(diǎn)皮下注射。2周后，小鼠尾靜脈注射C-BSA（13mg/kg），每周3次，隔日注射。 小鼠免疫后6周，收集其尿液、血液和腎標(biāo)本做進(jìn)一步的分析。測(cè)定小鼠的尿蛋白、血甘油三酯、總蛋白、白蛋白、總膽固醇、尿素、低密度脂蛋白、膽固醇和肌酐等。 同時(shí)處死小鼠，將小鼠腎組織分成三部分，分別進(jìn)行PASM染色、免疫熒光和電鏡。取一部分腎組織經(jīng)中性甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)切片，作PASM 染色和小鼠的IgG的免疫熒光染色。采用間接熒光染色方法進(jìn)行IgG染色: 將切片置于避光的濕盒內(nèi)，PBS清洗后，滴加100μL 自發(fā)熒光淬滅劑，37℃，60min。PBS清洗后，滴加兔抗小鼠的 IgG（1∶200）4℃ 孵育過(guò)夜。待PBS清洗后，每張切片加入DyLight TM488標(biāo)記的山羊抗兔熒光二抗（1∶100），室溫下避光孵育60min。PBS 清洗后，緩沖甘油封片，熒光顯微鏡下觀察。將一部分的腎樣品切成2mm×2mm的小條，放入25g/L的戊二醛固定，而后進(jìn)行脫水、置換、浸透、聚合、切片、染色、超薄切片，透射電鏡觀察。 |
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