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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 綜合其他 » 染色 | 鈣鹽染色方法
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染色 | 鈣鹽染色方法
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鈣在人體內大量存在，存在形式分兩種，一種離子鈣，另一種結合鈣，它們在正常的情況下滲透在所有組織和細胞中，構成骨骼作為支持人體的支架，在分泌、運送、肌肉收縮、神經(jīng)傳導等方面起著重要的作用。 許多染料可以與鈣形成螯合物，包括茜素紅S、紅紫素、核固紅等。鈣鹽染色常用的方法有兩種，分別是：硝酸銀法和茜素紅S法。其中硝酸銀法的原理是金屬置換，硝酸銀溶液作用于含有不溶性鈣鹽的切片時，鈣被銀所置換，銀鹽在光的作用下被還原為黑色金屬銀，適用于大量樣本的鈣鹽組織染色；茜素紅S屬一種蒽醌類衍生物，是茜素磺酸鈉鹽，它能與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復合物，染色液采用茜素紅S和固綠，鈣鹽和固綠結合形成橙紅色沉淀，適用于少量鈣鹽組織的染色。 一、硝酸銀法 操作步驟： 1、切片脫蠟至水，蒸餾水洗； 2、浸入1%的硝酸銀液中于強陽光下作用30-60min； 3、蒸餾水洗； 4、2%硫代硫酸鈉水溶液處理2min； 5、水洗； 6、淺染胞核5min左右； 7、水洗，分化并藍化； 8、伊紅染2-3min； 9、常規(guī)處理，脫水透明，中性樹膠封閉。 實驗結果：鈣鹽呈黑色，胞核呈藍色，其余為粉紅色。 注意事項： 1、鈣鹽組織固定以中性福爾馬林為佳。 2、作用時間取決于陽光照射時光的強度和時間。 二、茜素紅S法 操作步驟： 1、組織固定于10%中性福爾馬林或乙醇，常規(guī)脫水包埋；； 2、切片至95%乙醇； 3、載玻片豎立放置，徹底風干； 4、切片入含茜素紅S染色液的玻片染缸，浸染1-5min； 5、蒸餾水快速沖洗； 6、入固綠染色液復染1min； 7、蒸餾水沖洗3次； 8、常規(guī)脫水透明，中性樹膠封閉。 實驗結果：鈣沉積物呈橙紅色，背景呈綠色。 注意事項： 1、茜素紅S染色時間根據(jù)鈣鹽的含量來確定。可在顯微鏡下面觀察，見鈣鹽成較深的橙紅色即取出水洗，如染色液時間過長，就出現(xiàn)彌散現(xiàn)象，一般1-2min即可。 2、經(jīng)過茜素紅S染色液染色后，鈣沉積物是雙折射的。 上述染色方法可用于組織切片鈣鹽染色的同時，也可以用于細胞爬片的鈣鹽染色， 用硝酸銀法對誘導的大鼠成骨細胞進行鈣鹽染色，步驟及結果如下： 1、細胞爬片固定（4%多聚甲醛）； 2、浸入1%的硝酸銀液中于強陽光下作用30-60min； 3、蒸餾水洗； 4、2%硫代硫酸鈉水溶液處理2min； 5、蒸餾水洗； 6、淺染胞核5min左右； 7、蒸餾水洗，分化并藍化； 8、伊紅染2-3min； 9、常規(guī)處理，脫水透明，中性樹膠封閉。 |
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