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動物模型 | 大鼠原位腎移植模型的建立
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腎移植是目前尿毒癥患者的首選治療手段。由于臨床試驗的諸多限制性，因而建立合適的腎移植動物模型對腎移植相關基礎及應用研究具有重要的應用價值。 動物的選擇 大鼠是目前進行腎移植基礎實驗研究的重要動物。 造模方法 由于大鼠腎靜脈壁薄脆弱及輸尿管纖細迂曲的特點，在動物模型構建的過程中靜脈吻合和尿路重建往往成為重點、難點所在，時常制約和影響整個實驗進程。通過不斷摸索及技術改進，目前采用動脈端端吻合、靜脈端端吻合和輸尿管端端吻合法建立一種穩(wěn)定、可靠的大鼠腎移植模型。 試驗動物 無特定病原體（SPF）級Wistar雄性大鼠，體重250～300g。供受鼠均為Wistar大鼠。 模型的建立方法 1、供腎切取 1%戊巴比妥鈉10ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，備皮消毒，仰臥位取腹正中切口，沿腹中線從劍突下至恥骨聯(lián)合上剪開皮膚及肌肉進入腹腔，勿傷及腸道。打開后腹膜，滴注2%的利多卡因約1ml于血管，保持血管濕潤的同時還可以減輕血管游離過程中的痙攣現(xiàn)象。顯微鑷游離輸尿管，注意保留伴行血管，游離至腎下極2cm處斜行剪斷輸尿管。游離腎臟至近腎門處，保留少量腎周脂肪組織以便牽拉腎臟。自近端向遠端游離腎動脈及腎靜脈至近腎門，8-0顯微縫線結扎腎靜脈分支，如性腺血管、腎上腺動靜脈。處理腎動靜脈時，仔細操作，注意變異小分支的存在，并同樣分離結扎或電刀電灼止血。 腎動脈、腎靜脈、下腔靜脈及腹主動脈游離充分后，取1ml 肝素生理鹽水（100 U/ml）于陰莖背靜脈注射，全身肝素化受鼠。于左腎動脈與右腎動脈間腹主動脈下方穿過6-0絲線一根，打好空的外科結、暫不收緊。腹主動脈分叉處上方以同樣的方法置空結線一根，并以血管夾于此線下方阻斷腹主動脈，收緊最上方的外科結，緊貼下腔靜脈剪斷左腎靜脈。于血管夾阻斷水平以上的腹主動脈以28G留置針穿刺，收緊預置的6-0空結線，固定針頭。 緩慢勻速注入4℃肝素生理鹽水，可見腎靜脈端口流出血性液體，持續(xù)注入灌注液至靜脈端流出液為無色，腎臟顏色蒼白為止，總量約5ml。近腹主動脈離斷腎動脈，取下腎臟，放入已預置冰上的肝素生理鹽水中。 2、供腎移植 同供鼠操作，暴露受鼠游離腎臟，結扎腎上腺、性腺血管等分支，游離左腎動脈、腎靜脈，于腎門下約1cm處結扎并斜行剪斷輸尿管。近腹主動脈及下腔靜脈，以動脈夾阻斷腎動脈、腎靜脈，近腎門剪斷腎動、靜脈，移除受體左腎。用肝素生理鹽水沖洗近端殘端，盡量沖出殘留血液，修剪斷面。用紗布自制帶洞腎袋，置入供腎，使腎動脈、靜脈和輸尿管經(jīng)洞口暴露于腎袋外，腎袋表面撒少量冰水，以保持腎臟低溫。 首先吻合位于背面的腎動脈，采用11-0帶針縫線兩定點法行間斷吻合。首先于腎動脈上方和下方縫合兩針，分別用血管夾固定作牽引。先縫合前壁，在前壁正中縫合一針，暫不打結。在中點針與上、下定點的中點處各縫合一針，均暫不打結，待3針均結束以后依次打結。翻轉固定線，使后壁朝前，同法縫合后壁，完成后剪斷固定線，動脈共計吻合8針（含兩定點）。 腎靜脈也采用兩定點法，11-0帶針縫線連續(xù)縫合。先縫合后壁，縫完后壁后與相連固定線打結，無需翻轉固定線，繼續(xù)縫合前壁。前后壁各縫合7針左右，縫合完成后剪斷固定線。 經(jīng)陰莖背靜脈注入含80kU青霉素鈉的溫生理鹽水約3ml補充血容量，使用血管夾分別阻斷吻合口遠端的腎動脈及腎靜脈，開放吻合口近端血管夾，觀察血管通暢與否，是否有明顯滲漏。一般而言，開放血管后初期可見吻合口少量滲血，采用棉簽輕輕壓迫1分鐘后即可止血。如出血明顯難以止住，則可謹慎進行補縫。血管吻合通暢后剪開腎袋，開放腎門處血管夾，觀察腎臟灌注后顏色與質(zhì)地，輸尿管口有無尿液流出。如吻合口通暢，30秒內(nèi)可見腎臟迅速變紅，質(zhì)地變硬，動脈搏動良好，靜脈充盈。 繼續(xù)觀察輸尿管口5分鐘左右，見尿液流出后行輸尿管端端吻合。采用11-0帶針縫合線，斜行貼合兩輸尿管殘端，分別于4點間斷縫合輸尿管。 最后切除右側腎臟，檢查腹腔有無活動性出血，溫生理鹽水沖洗腹腔，以利于受鼠復溫。使用3-0帶針縫合線縫合肌肉、皮膚，手術結束。 結果 一般認為，大鼠失去雙側腎臟24小時內(nèi)將死亡，因此，選擇術后3天為界限，判斷腎移植是否成功。 |
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