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96孔板接種細胞步驟
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為了做實驗，細胞鋪勻是常見的一種。然而，有許多人不是很成功，分布也不均勻:要么中間密集，周圍稀疏，要么周圍密集，中間禿頂。以下是利用96孔板把細胞鋪勻，希望對大家有用! 方法/步驟 1、通常，在96孔板的每個孔中加入100微升細胞懸浮液。 從底部附近的井的左側(cè)添加細胞懸浮液。 加入一半平板后，混合細胞懸液，不要再加入，繼續(xù)加入剩余的一半平板。 添加完所有板后，蓋上板，用左手輕輕握住板的左側(cè)，用右手輕輕輕敲板的右邊緣，注意抓力(我通常輕敲三次)。 如果它太強或太多次，細胞就會被濃縮和堆積。 順時針旋轉(zhuǎn)盤子(逆時針效果不好)，依次敲擊剩余的三面，靜置約5分鐘，放入37度培養(yǎng)箱中。 對于6孔板、12孔板或24孔板，我在第一個孔中加入少量無血清培養(yǎng)基，搖動并滲透到整個孔的底部，然后用移液管槍將整個孔的底部吸到第二個孔中。用同樣的方法滲透到井底，同時模擬其它井，這樣整個井底都是濕的，細胞懸浮液將平放在整個井底。 加入細胞懸液時，可以避免中間加入更多細胞，中間加入更少細胞的現(xiàn)象，細胞分散更均勻。 注意，加入細胞懸液后，細胞懸液應(yīng)放在工作臺上靜置。這個方法有點慢，但是當你熟練的時候它并不慢。也可以涂抹，但強度不如96孔板，效果不如96孔板，所以我放棄了滲透井底的方法。 2、加入細胞懸液后，抬起細胞培養(yǎng)板，從底部向上觀察光線，看細胞是否聚集。然后從底部敲擊以分散它。 3、如果實驗室有平板振蕩器，建議用這個儀器輕微振蕩。 效果好，即振幅小、頻率高。 4、細胞應(yīng)該盡可能分散，大多數(shù)細胞處于單一狀態(tài)。離心后，完全懸浮!有轉(zhuǎn)移到六孔板上的，就是震動!搖晃時，不要讓細胞液轉(zhuǎn)向，否則細胞會全部被帶到中間而不均勻! 5、當一瓶細胞裝滿后，進行正常處理。 將它均勻地吹進培養(yǎng)瓶中，然后鋪上6孔板，每孔2ml。 涂抹后，不用觀察直接用酒精棉擦拭，然后放入培養(yǎng)箱中。 稍微向左三圈，向右三圈，先三圈，然后三圈。基本上，24小時后，每個孔中的細胞將非常均勻。 6、計算所有所需的液體和細胞數(shù)量，混合均勻，并將其添加到六孔板中。 六孔板呈水平8字形波動。 在顯微鏡下觀察。 如果不均勻，按照上述方法再次搖動。如果細胞沒有計數(shù)并直接種植，在種植六孔板的過程中隨時搖動混合瓶。 我通常順時針或逆時針轉(zhuǎn)動瓶子。 7、先上下移動，然后在水平板上左右移動，每個方向移動5-6次，但關(guān)鍵是搖動后直接放入培養(yǎng)箱，不要做太多的運動，如照鏡子，否則很容易在中間再次聚在一起。 公眾號：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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