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細胞融合的方法有哪些
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一、細胞融合的方法有三種：生物方法、化學(xué)方法、物理方法。 二、細胞融合也稱細胞雜交 , 是指細胞通過介導(dǎo)和培養(yǎng), 在離體條件下用人工方法將不同種的細胞通過無性方式融合( 合并) 成一個核或多核的雜合細胞的過程。體細胞融合后可形成四倍體或多倍體細胞，由此形成的雜交細胞，其特性會有很大的變化。 三、化學(xué)誘導(dǎo)融合 1.鹽類融合法。此法是應(yīng)用最早的誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法。鹽類融合劑對原生質(zhì)體的破壞小。今后研究應(yīng)提高其融合率 ,使其對液泡化發(fā)達的原生質(zhì)體能夠誘發(fā)融合。 2高鈣和高pH值融合法。高 Ca2+和高pH值可以誘發(fā)融合。提高該方法的使用范圍是亟待解決的問題。 3、聚乙二醇融合法(PEG法) 。1974年發(fā)現(xiàn)的聚乙二醇(PEG)使不同科屬的植物原生質(zhì)體之間都可以融合，融合率可達30%。聚乙二醇是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子量的多聚體。PEG可與水分子借氫鍵結(jié)合，導(dǎo)致細胞脫水而發(fā)生質(zhì)膜結(jié)構(gòu)的變化，從而引起細胞融合。為了發(fā)揮PEG促進細胞融合的效力，必須采用較高的濃度(40%～50%，分子量為6000)，但PEG在高濃度下，細胞可能因脫水而受到顯著的破壞。因此，選擇合適的分子量、濃度及作用時間是PEG融合技術(shù)的關(guān)鍵。影響原生質(zhì)體融合的因素很多。特別是環(huán)境中的陽離子存在，融合時的pH 也對原生質(zhì)體融合有較明顯的影響。一般來講鈣、鎂離子有助于融合。如有鈣離子存在時，可得到較高的融合率。但在缺乏鈣離子時，若pH 較低，融合頻率也較高。這是因為鈣離子和帶負電荷的PEG與細胞膜表面分子相互作用，使原生質(zhì)體帶電，彼此易于附著發(fā)生凝集所致。PEG誘導(dǎo)細胞融合由于具有容易制備和控制、活性穩(wěn)定、使用方便等特點，在細胞融合領(lǐng)域取得了可喜的成績，大量的研究仍采用此法。雖然PEG作為融合劑有很多成功的報道，但存在著對細胞損傷大、殘存有毒性、融合率較低及經(jīng)驗性大等缺陷。 四、 物理誘導(dǎo)融合 1.細胞電融合技術(shù)細胞電融合是以脂質(zhì)膜和脂質(zhì)一蛋白質(zhì)膜的電學(xué)性質(zhì)為基礎(chǔ)的，以雙向電泳和電子擊穿細胞質(zhì)膜的聯(lián)合作用為手段，和細胞電注射構(gòu)成一對互補技術(shù)。在短時間強電場的作用下，細胞膜發(fā)生可逆性電擊穿(Reverisb leb reakdown)，瞬時失去其高電阻和低通透特性，然后在數(shù)分鐘后恢復(fù)原狀。當可逆電擊穿發(fā)生在兩個相鄰細胞的接觸區(qū)時，即可誘導(dǎo)他們的膜相互融合，從而導(dǎo)致細胞融合。細胞融合分為兩步：第一步是建立細胞間接觸(cell-to-cell contact) ； 第二步，接受區(qū)膜結(jié)構(gòu)受擾動而紊亂，然后恢復(fù)并融合。根據(jù)其誘導(dǎo)細胞接觸的性質(zhì)，分為特異性和非特異性兩大類。非特異性細胞電融合法是指在進行細胞電融合時，無法排除親本細胞的自體融合而只進行雙親本間的細胞雜交融合。主要原因是細胞間的相互接觸是無選擇性的，是非特異性細胞聚集。非特異性電融合技術(shù)包括細胞物理聚集電融合法和細胞化學(xué)聚集電融合法。細胞融合所必需的兩個步驟為：①細胞間接觸；②接觸區(qū)的膜結(jié)構(gòu)受到瞬間擾動而導(dǎo)致融合。只要其中的任意一步有特異性，就能形成特異性的細胞融合。 2.激光誘導(dǎo)法。激光誘導(dǎo)細胞融合術(shù)是利用激光微束對相鄰細胞接觸區(qū)的細胞膜進行破壞(或擾動)，可將兩個不同特性、不同大小的細胞在顯微鏡下實現(xiàn)融合。即利用光鑷捕捉并拖動一個細胞使之靠近另一個細胞并緊密接觸，然后對接觸處進行脈沖激光束處理，使質(zhì)膜發(fā)生光擊穿，產(chǎn)生微米級的微孔。這樣，由于質(zhì)膜上微孔的可逆性，細胞開始變形融合，最終成為一個細胞。使用此技術(shù)時，使細胞接觸的方法可用①光俘虜法；②用低濃度的融合劑PEG (5% )使細胞聚法。目前，最新穎的方法是利用激光光阱建立兩細胞間接觸，即光鑷利用激光高斯光束光場的梯度力把細胞從光束邊緣拉向光束中間，在光斑直徑與光波波長尺度相比擬時，指向束腰的軸向梯度力要大于沿光束方向的散射力，該梯度力把細胞豎直地拉到激光束腰下方處，從而實現(xiàn)對細胞的操作。 公眾號：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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