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胎牛血清的正確存放與解凍
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胎牛血清的正確存放與解凍是各位實驗家尤為關(guān)注的一個問題，經(jīng)過專業(yè)人員從其成分中分析，在保證質(zhì)量的前提下，胎牛血清的正確存放與解凍的方法，總結(jié)如下： 1)保存血清最好的方法? 我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。 2)如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損? 我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。 3)血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理? 血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。 若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g 稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。 4)為什么要熱滅活血清? 加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養(yǎng)ES 細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。 5)有必要做熱滅活嗎? 實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時間，更確保血清的質(zhì)量! 6)為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)少量沉淀? 胎牛血清沒有預(yù)老化，儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在-20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。 7)如何避免沉淀物的產(chǎn)生? 我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作： 解凍血清時請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。 公眾號：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學、天然產(chǎn)物 |
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