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出被窩鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
原核表達誘導不出來，6月份還能誘導出來，同樣的條件現(xiàn)在誘導不出來了
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最近嘗試表達純化真菌的幾丁質(zhì)酶和絲氨酸蛋白酶（1200bp），使用pet28a作為載體、轉(zhuǎn)到bl21(de3)里。6月底和師姐一起連接轉(zhuǎn)化時表達出來蛋白，7月份用碧云天his標簽純化試劑盒沒純化出來。9月——11月發(fā)現(xiàn)誘導都誘導不出來了，我還把之前凍存的菌液拿出來也不行，誘導步驟都一樣，重送出去測序也沒問題（生工測序，測出的片段序列和我插入進去的是同一個片段）。我重新連接轉(zhuǎn)化按原步驟重新構(gòu)建了質(zhì)粒，也是測序正確誘導不出來啊啊啊啊啊啊 我誘導條件:37℃ 180r 過夜誘導 iptg濃度0.1mM-2mM設(shè)了5個梯度，沒一個出來的 或者我16或25℃誘導試試？ 我接下來要嘗試連32a嗎？ 或者更換感受態(tài)？ 話說是這應(yīng)該質(zhì)粒的問題還是感受態(tài)的問題��？ 求助各位大神幫忙分析一下原因  6月份的.png 昨天的.png |
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2樓2023-11-02 13:49:04
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出被窩3樓2023-11-02 15:39:47
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4樓2023-11-02 16:19:07
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1.要換算下對應(yīng)的蛋白分子量 以及載體插入的酶切位點加上載體的表達的氨基酸分子量 2.用非誘導的作為對照 3.注意加抗性培養(yǎng)基篩選目的菌 4.加我qq我來系統(tǒng)指導 5.歡迎找我選購試劑儀器 優(yōu)惠多多 價格可談可開票 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2023-11-04 19:01:11
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6樓2023-11-04 21:54:10
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