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原代細胞培養(yǎng)小知識
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很多老師在設計科研實驗的時候都會很迷茫，到底用什么細胞好？ 越來越多的老師開始傾向于原代細胞的科研實驗，在設計實驗中，原代細胞和細胞株到底該怎么選擇呢？ 原代細胞的定義： 原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養(yǎng)。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實際上，我們通常把第1代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。 原代細胞因為可以模擬機體的功能，主要用于：生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究 培養(yǎng)原代細胞的小知識： 一、解凍 原代細胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴鍋中，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶，并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準備就緒，以便可以立即用于接種細胞，并置于培養(yǎng)箱中，我們在使用cell systems的原代視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞時，復蘇的時候沒有去離心，第二天換個液就可以。 二、傳代 原代細胞有間隙抑制接觸不良反應，所以細胞不能到達100%的密度的時候傳代，一般蕞有效的建議觀察細胞的生長周期，Cell Systems的原代細胞在細胞密度達到85%左右的時候傳代蕞佳，當生長至100％匯合時，它就會衰老。記住，所有的原代細胞不是100％純，因此我們要盡量減少污染細胞的生長。當細胞傳代時，使用低濃度的胰蛋白酶，并在顯微鏡下密切監(jiān)測細胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。 三、凍存 通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓�。原代細胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導致細胞死亡或損傷。 與細胞系不同，原代細胞增殖有限，我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移，如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型，你應該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。 正常的原代細胞培養(yǎng)，在無污染的情況下，建議培養(yǎng)基中不加抗體，抗體會影響細胞的某些基因變異從而導致實驗數(shù)據(jù)有差異，所以cell systems的細胞在分離提取時就考慮到這點，他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時，通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細胞達到95%以上的純度，這樣得到的實驗數(shù)據(jù)更為準確。 原代細胞培養(yǎng)優(yōu)點 (1) 細胞剛離開機體，生物學性狀與原體內(nèi)細胞比較接近，相比之下，細胞系的一個缺點是它們往往與原始的組織有不一樣的遺傳和表型，而原代細胞保持了細胞在體內(nèi)的許多重要標志和功能。 (2) 細胞的初代培養(yǎng)也是建立各種細胞株（系）的必經(jīng)階段。 公眾號：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務內(nèi)容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關、生命科學、天然產(chǎn)物 |
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