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Transwell侵襲實驗步驟 已有1人參與
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1. 實驗準備 提前12 h將Matrigel放到4℃融化，將實驗用到的槍頭、EP管等材料提前放到-20℃預冷；實驗前準備冰盒，整個實驗操作過程置于冰上進行； 2. 包被基底膜 在冰上將Matrigel膠用無血清的細胞培養(yǎng)基進行稀釋，混勻后加入小室中，注意動作輕柔，不要產(chǎn)生氣泡，將小室放入CO2培養(yǎng)箱中孵育2h備用； 3. 水化基底膜 將孵育完成的小室中上室多余的液體小心吸掉，每孔中加入100 μL無血清培養(yǎng)基，在培養(yǎng)箱中放置30 min。 4. 接種細胞 a. 將狀態(tài)良好的細胞進行消化，離心，用PBS洗1-2遍，用無血清培養(yǎng)基重懸細胞，調整細胞密度至1-10×105/ml（需要做預實驗確定具體的細胞密度）； b. 在下室中加入500μL的含10%FBS的培養(yǎng)基，將小室小心放入24孔板內，在上室中加入細胞懸液100 μL-200 μL，放入培養(yǎng)箱中（需要做預實驗確定具體的培養(yǎng)時間）。 5. 固定染色、拍照及計數(shù) a. 到時間點后將小室取出，用PBS清洗小室，用棉簽輕柔擦去上室細胞和Matrigel后，用4%多聚甲醛固定或甲醇20 min，將小室適當風干，用0.1%結晶紫染色30 min，PBS清洗3遍，于37℃干燥。 b. 將小室置于顯微鏡下，隨機選取5個視野，拍照并計數(shù)。 |
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3樓2023-11-01 08:42:51
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謝謝分享 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2023-10-17 15:29:40
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