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Mr德古拉

木蟲 (正式寫手)


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大腸桿菌規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)初期自溶,希望大家給支招
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我最近遇見的問題是,大腸桿菌培養(yǎng)過程中,搖瓶種子罐生長都正常,進入發(fā)酵罐培養(yǎng)2-3h時菌體出現(xiàn)溶氧、pH回升,OD下降的情況,但是過9-16h后,發(fā)酵罐菌體會重新生長,目標產(chǎn)物單位也正常。這個問題是突然出現(xiàn)的,我們之前發(fā)酵陪養(yǎng)條件都沒有改動過。已經(jīng)連續(xù)出現(xiàn)該問題多次了,生產(chǎn)過程中,我們也嘗試用原始菌種進行接種,但同樣會出現(xiàn)這個問題,目前想不出辦法了。感覺不是噬菌體引起的。

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yugege2009

至尊木蟲 (知名作家)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
引用回帖:
22樓: Originally posted by Mr德古拉 at 2023-09-30 09:13:25
不會吧,溶氧回升后,過一段時間還會下降,繼續(xù)生長
...

可能是葡萄糖用完了,開始用其他糖了。需要一個時間的轉(zhuǎn)變。

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26樓2023-09-30 09:28:25
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Mr德古拉

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
61樓: Originally posted by 后來就算 at 2023-10-08 12:24:16
1、菌種是工程菌嗎---一般質(zhì)粒導入的有出現(xiàn)二次生長情況?煽紤]抗生素濃度
2、營養(yǎng)物質(zhì)消耗完畢與代謝物的切換---考慮培養(yǎng)基的組成,種子培養(yǎng)基與發(fā)酵培養(yǎng)基是否差距較大;另就是,接種后前期OD是否較高,可考慮適 ...

出現(xiàn)這個現(xiàn)象會較大的延遲培養(yǎng)時長

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62樓2023-10-09 12:03:19
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zyzhen

鐵蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
我們遇到過同樣的問題,后來不加抗生素會好一些。自溶的機率會降低。
66樓2023-10-11 14:40:41
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小C:O

新蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
污染了,之前碰到過這樣,雜菌影響了本菌的生長,出現(xiàn)自溶在,做噬菌斑檢測,以為是噬菌體,過幾個小時后又會重新生長,后面我們改了尾氣就解決了

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88樓2023-12-21 12:45:45
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yugege2009

至尊木蟲 (知名作家)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
噬箘體貌似不會漲回來,是不是在那個時間加誘導劑了。

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5樓2023-09-30 07:50:30
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Mr德古拉

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
5樓: Originally posted by yugege2009 at 2023-09-30 11:50:30
噬箘體貌似不會漲回來,是不是在那個時間加誘導劑了。

沒有,在加誘導劑之前,也沒有補料,這個時間點上沒有任何操作

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7樓2023-09-30 07:51:48
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yugege2009

至尊木蟲 (知名作家)


引用回帖:
7樓: Originally posted by Mr德古拉 at 2023-09-30 07:51:48
沒有,在加誘導劑之前,也沒有補料,這個時間點上沒有任何操作
...

可能糖沒了

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17樓2023-09-30 08:47:58
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Mr德古拉

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
17樓: Originally posted by yugege2009 at 2023-09-30 12:47:58
可能糖沒了
...

不會吧,溶氧回升后,過一段時間還會下降,繼續(xù)生長

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22樓2023-09-30 09:13:25
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yugege2009

至尊木蟲 (知名作家)


引用回帖:
22樓: Originally posted by Mr德古拉 at 2023-09-30 09:13:25
不會吧,溶氧回升后,過一段時間還會下降,繼續(xù)生長
...

沒不加什么嗎

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24樓2023-09-30 09:23:46
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Mr德古拉

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
24樓: Originally posted by yugege2009 at 2023-09-30 13:23:46
沒不加什么嗎
...

除了移種,沒有其他操作

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25樓2023-09-30 09:25:42
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yugege2009

至尊木蟲 (知名作家)


引用回帖:
25樓: Originally posted by Mr德古拉 at 2023-09-30 09:25:42
除了移種,沒有其他操作
...

額,你這解釋有點亂。

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27樓2023-09-30 09:29:56
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Mr德古拉

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
27樓: Originally posted by yugege2009 at 2023-09-30 13:29:56
額,你這解釋有點亂。
...

我也沒解釋,,移種至發(fā)酵罐后,什么操作都沒有

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29樓2023-09-30 09:35:31
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草辦雨田

新蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
你是幾級發(fā)酵?發(fā)酵罐基料中有葡萄糖和甘油嗎?還是有別的碳源?

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55樓2023-10-01 22:55:26
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Mr德古拉

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
55樓: Originally posted by 草辦雨田 at 2023-10-02 02:55:26
你是幾級發(fā)酵?發(fā)酵罐基料中有葡萄糖和甘油嗎?還是有別的碳源?

兩級發(fā)酵,搖瓶接種子罐,種子罐移發(fā)酵罐,碳源用的是葡萄糖

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56樓2023-10-02 12:57:59
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后來就算

金蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
1、菌種是工程菌嗎---一般質(zhì)粒導入的有出現(xiàn)二次生長情況?煽紤]抗生素濃度
2、營養(yǎng)物質(zhì)消耗完畢與代謝物的切換---考慮培養(yǎng)基的組成,種子培養(yǎng)基與發(fā)酵培養(yǎng)基是否差距較大;另就是,接種后前期OD是否較高,可考慮適當下調(diào)一些。


最后,“目標產(chǎn)物單位也正!笔鞘裁匆馑,那之前的現(xiàn)象還是個問題嗎
61樓2023-10-08 08:24:16
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Mr德古拉

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
66樓: Originally posted by zyzhen at 2023-10-11 18:40:41
我們遇到過同樣的問題,后來不加抗生素會好一些。自溶的機率會降低。

謝謝指導,我們種子罐加抗生素,發(fā)酵罐不加抗生素

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71樓2023-10-14 18:55:50
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xiaomengms

鐵蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
應該不是噬菌體,如果是噬菌體的話,2到3小時后鏡檢就看不到目標菌了。是不是剛開始你的發(fā)酵培養(yǎng)條件不合適

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74樓2023-10-20 20:00:10
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xiaomengms

鐵蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
引用回帖:
26樓: Originally posted by yugege2009 at 2023-09-30 09:28:25
可能是葡萄糖用完了,開始用其他糖了。需要一個時間的轉(zhuǎn)變。
...

利用葡萄糖不會這么快

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75樓2023-10-20 20:02:33
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Mr德古拉

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
74樓: Originally posted by xiaomengms at 2023-10-21 00:00:10
應該不是噬菌體,如果是噬菌體的話,2到3小時后鏡檢就看不到目標菌了。是不是剛開始你的發(fā)酵培養(yǎng)條件不合適

我也是懷疑菌體不適應新環(huán)境

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76樓2023-10-21 10:30:38
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qbin1304

新蟲 (正式寫手)



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請問樓主解決這個問題了嗎,我們也會遇到這個問題,出現(xiàn)的時間有時候是4-5小時,有時候9-10小時
79樓2023-11-03 11:35:13
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寒樂樂

新蟲 (小有名氣)



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可能是種子活性差,降低接種量試試
83樓2023-11-25 14:02:26
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402222903

木蟲 (正式寫手)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
這種就兩種原因一般,菌株構(gòu)建不好,工藝還不適應
89樓2023-12-28 16:38:13
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沙漠肥牛

鐵蟲 (初入文壇)



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我們也遇到類似的問題,而且是兩個罐,同一個種子,接種到發(fā)酵罐,一個有這個現(xiàn)象,一個正常發(fā)酵?梢源_定的是不是噬菌體,但是找不到根本的原因。
95樓2024-02-05 16:33:40
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Mr德古拉

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
88樓: Originally posted by 小C:O at 2023-12-21 16:45:45
污染了,之前碰到過這樣,雜菌影響了本菌的生長,出現(xiàn)自溶在,做噬菌斑檢測,以為是噬菌體,過幾個小時后又會重新生長,后面我們改了尾氣就解決了

我們的問題現(xiàn)在解決了,推測原因可能是兩個:1)菌種冷凍管存在雜菌(對菌種進行了純化);2)菌種培養(yǎng)環(huán)境污染(我們更換了接種間、搖床培養(yǎng)間等)。從24年初至現(xiàn)在沒有再出問題。
100樓2024-11-15 15:25:52
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