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實驗室常用哪些細胞破碎方法
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細胞破碎方法簡述 隨著重組DNA技術(shù)得到廣泛應用以來，生物技術(shù)發(fā)生了質(zhì)的飛躍。很多基因工程產(chǎn)物都是胞內(nèi)物質(zhì)，必須將細胞破壁，使產(chǎn)物得以釋放，才能進一步提取，因此細胞破碎是提取胞內(nèi)產(chǎn)物的關(guān)鍵步驟，破碎方法的得當與否，直接影響到所提取產(chǎn)品的產(chǎn)量、質(zhì)量和生產(chǎn)成本。現(xiàn)將近年來常用的幾種細胞破碎方法介紹一下。 1. 高壓勻漿法 設備是高壓勻漿器，它由高壓泵和勻漿間組成，美國Microfluidics公司和ATS公司均有產(chǎn)品出售。其破碎機理：細胞在一系列過程中經(jīng)歷了高速造成的剪刀，碰撞以及由高壓到常壓的變化從而造成細胞的破碎�！ 〈嬖诘膯栴}；較易造成堵塞的團狀或絲狀真菌，較小的革蘭氏陽性首以及有些亞細胞器，質(zhì)地堅硬，易損傷勻漿閥，也不適合用該法處理。 2. 高速珠磨法 設備是珠后機，瑞士WBC公司和德國西門子機械公司均制造各種型號的珠磨機，其破碎機下：微生物細胞懸浮液與極細的研磨劑在攪拌漿作用下充分混合，珠子之間以及珠子和細胞之間和互相剪切、碰撞，促使細胞壁破碎，釋出內(nèi)含物，在珠波分離器的協(xié)助下，珠子被滯留在破碎室內(nèi)，漿液流出，從而實現(xiàn)連續(xù)操作，破碎中，生的熱量由夾套中的冷卻液帶走�！ 〈嬖诘膯栴}：操作參數(shù)多，一般賃經(jīng)驗估計并且珠子之間的液體損失30％左右。 3. 超聲破碎 頻高于15-20KHz的超聲波在高強度聲能輸入下可以進行細胞破碎。其破碎機理：可能與空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪切力有關(guān)。超聲破碎的效率與聲頻、聲能、處理時間、細胞濃度及首種類型等因素有關(guān)�！ 〈嬖趩栴}；超聲波破碎在實驗室規(guī)模應用較普遍，處理少量樣品時操作簡便，液量損失少，但是超聲波產(chǎn)生的化學自由基團能使某些敏感性活性物質(zhì)變性失活。而且大容量裝置聲能傳遞，散熱均有困難。 4. 酶溶法 就是用生物酶將細胞壁和細胞臘消化溶解的方法。常用的溶酶有溶菌酶β-1．3-葡聚糖酶、蛋白酶等�！ 〈嬖诘膯栴}；易造成產(chǎn)物抑制作用，這可能是導致胞內(nèi)物質(zhì)釋放率低的一個重要因素。而且溶酶價格高，限制了大規(guī)模利用。若回收溶酶，則又增加百分離純化溶酶的操作。另外酶港法通用性差，不同菌種需選擇不同的酶。 5. 化學滲透法 某些有機溶劑（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等化學藥品都可以改變細胞壁或膜的通透性從而使內(nèi)合物有選擇地滲透出來。其作用機理；化學滲透取決于化學試劑的類型以及細胞壁和膜的結(jié)構(gòu)與組成�！ 〈嬖诘膯栴}；時間長，效率低；化學試劑毒性較強，同時對產(chǎn)物也有毒害作用，進一步分離時需要用透析等方法除去這些試劑；通用性差：某種試劑只能作用于某些特定類型的微生物細胞。 作者：畢合生物 公眾號：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務內(nèi)容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學、天然產(chǎn)物 |
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