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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者長(zhǎng)安某吖將贈(zèng)送您 5 個(gè)金幣 | ||
長(zhǎng)安某吖鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
用CRISPR技術(shù)進(jìn)行基因敲除后消除質(zhì)粒后基因回補(bǔ)了
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 各位師兄師姐，老師們，我最近在做基因敲除的時(shí)候，用的CRISPR技術(shù)，使用的是pJOE8999質(zhì)粒，菌株是蘇云金芽孢桿菌，在消除基因的時(shí)候，電轉(zhuǎn)進(jìn)入芽孢桿菌后送了一次測(cè)序，測(cè)序結(jié)果是敲除掉了，然后進(jìn)行無(wú)抗LB轉(zhuǎn)接三次消除質(zhì)粒后，所有點(diǎn)板的菌株都回補(bǔ)了敲除的那個(gè)基因，因?yàn)楸救艘矊?duì)這個(gè)也不太了解，（但是也不懂，還是去別人課題組學(xué)習(xí)的技術(shù)，對(duì)方實(shí)驗(yàn)室也無(wú)法給出答案，說(shuō)沒(méi)有遇到過(guò)，也嘗試過(guò)解決這個(gè)問(wèn)題，用T2系統(tǒng)敲除法也試過(guò)，但是也是在第二次單交換回補(bǔ)了，那就可能是同源交換發(fā)生在同一側(cè)，但是pJOE8999就不是這個(gè)原因）有沒(méi)有師兄師姐或者老師，能解答一下孩子的問(wèn)題嘛 非常感謝 |
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2樓2023-09-24 22:31:04
長(zhǎng)安某吖
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3樓2023-09-24 23:30:02
4樓2023-09-25 16:54:23
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5樓2023-09-26 18:24:20
燕燕吖吖
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您好，能否請(qǐng)教一下您的PJOE這個(gè)載體的sgRNA 怎么插入的？第一次做，如果你能幫忙指點(diǎn)一下那就太好啦嗚嗚，有償 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
6樓2024-01-20 17:29:20
Lee_95
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7樓2024-02-28 14:36:39
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