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移液器操作六部曲，別再犯這些小錯(cuò)誤! 已有1人參與
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移液槍是實(shí)驗(yàn)操作上不可缺少的工具，對(duì)于頂尖高手而言，重要的就是實(shí)驗(yàn)的誤差最小，重復(fù)再現(xiàn)性好，那就要注意正確移液槍使用，避免因小失大。 一.移液六部曲 1.裝吸頭 移液器套柄用力下壓，需要時(shí)小幅度旋轉(zhuǎn)即可。 錯(cuò)誤操作： 用力敲擊吸頭。此方法會(huì)帶來吸頭損壞甚至移液器套柄磨損，從而影響其密封性。 2.量程設(shè)定 操作之前請先選擇正確的移液器，移液器可在10～100%量程范圍內(nèi)操作，但在10%量程處操作對(duì)于移液技巧要求高，故推薦在35～100%量程范圍內(nèi)操作。 量程調(diào)節(jié)： 當(dāng)由小量程調(diào)節(jié)至大量程時(shí)，朝所需量程方向連貫旋轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)到達(dá)超過所需量程1/3圈處再回調(diào)至所需量程。當(dāng)由大量程調(diào)節(jié)至小量程時(shí)，直接連貫旋轉(zhuǎn)至所需量程。 3.潤洗 用同一樣品重復(fù)吸液排液二至三次，潤洗為以后每次吸液提供相同的接觸面，保證操作的一致性。 注意：高溫或者低溫液體請不要潤洗! 4.吸頭浸入角度 吸液時(shí)盡量保持垂直狀態(tài)，傾斜角度不能超過20° 5.吸頭浸入深度 6.吸頭浸入時(shí)間 吸液后在液面中保持一秒鐘再將吸頭平緩移開，這對(duì)于大容量移液器或者吸取粘性樣品尤為重要。 7.吸液速度 勻速連貫移液，控制好移液速度，太快會(huì)造成噴液，液體或者氣霧沖入移液器內(nèi)部，污染活塞等部件。 8.排液及吹液 先將活塞按至第一檔排液，略作停頓后按至第二檔進(jìn)行吹液。 排液四種方式： 9.手溫 移液器不宜長時(shí)間握在手里，不用時(shí)最好將其掛在支架上或者掛在手上晾一下。 二.移液槍使用訣竅 1.影響移液槍精度因素 (1)溫度： 室溫低時(shí)，手溫較高，使得空氣膨脹，吸入冷溶液時(shí)往往發(fā)生誤差; (2)氣密性： tip和槍體的結(jié)合部，以及槍內(nèi)柱體之間的長期磨損，造成誤差; (3)吸速： 容易造成tip內(nèi)氣泡產(chǎn)生，而且會(huì)污染槍頭; (4)試劑的揮發(fā)： 吸揮發(fā)性高的試劑時(shí)，蒸汽進(jìn)入槍頭，內(nèi)壓增高，結(jié)果在壓出液體時(shí)，壓力變大，而產(chǎn)生誤差; 解決辦法： 反復(fù)抽吸4～5次就可改善。 2.使用注意事項(xiàng) (1)吸取液體時(shí)一定要緩慢平穩(wěn)地松開拇指，絕不允許突然松開，以防將溶液吸入過快而沖入取液器內(nèi)腐蝕柱塞而造成漏氣; (2)為獲得較高的精度，吸頭需預(yù)先吸取一次樣品溶液，然后再正式移液，因?yàn)�，吸取血清蛋白質(zhì)溶液或有機(jī)溶劑時(shí)，吸頭內(nèi)壁會(huì)殘留一層“液膜”，造成排液量偏小而產(chǎn)生誤差; (3)濃度和粘度大的液體，會(huì)產(chǎn)生誤差，為消除其誤差的補(bǔ)償量，可由試驗(yàn)確定，補(bǔ)償量可用調(diào)節(jié)旋鈕改變讀數(shù)窗的讀數(shù)來進(jìn)行設(shè)定; (4)可用分析天平稱量所取純水的重量并進(jìn)行計(jì)算的方法，來校正取液器，1mL蒸餾水20℃時(shí)重0.9982g; (5)移液器反復(fù)撞擊吸頭來上緊的方法是非常不可取的，長期操作會(huì)使內(nèi)部零件松散而損壞移液器; (6)移液器未裝吸頭時(shí)，切莫移液; (7)在設(shè)置量程時(shí)，請注意，旋轉(zhuǎn)到所需量程，數(shù)字清楚顯示在窗中，所設(shè)量程在移液器量程范圍內(nèi)不要將按鈕旋出量程，否則，會(huì)卡住機(jī)械裝置，損壞移液器。 (8)移液器嚴(yán)禁吸取有強(qiáng)揮發(fā)性、強(qiáng)腐蝕性的液體(如，濃酸、濃堿、有機(jī)物等)。 (9)嚴(yán)禁使用移液器吹打混勻液體。 (10)不要用大量程的移液器移取小體積的液體，以免影響準(zhǔn)確度。同時(shí)，如果需要移取量程范圍以外較大量的液體，請使用移液管進(jìn)行操作。 三.移液器錯(cuò)誤操作及處理方法 做為液體操作中最常用的手動(dòng)可調(diào)精密移液器，在使用過程中有些錯(cuò)誤的操作會(huì)給操作本身帶來誤差，有些會(huì)造成機(jī)器的損壞等，在這里簡單總結(jié)如下： 錯(cuò)誤：裝配吸頭時(shí)用移液器反復(fù)撞擊吸頭，以上緊; 正確：插入吸頭，左右輕轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)上緊吸頭; 分析：撞擊會(huì)造成移液器內(nèi)部齒輪組合的松動(dòng)，長期操作會(huì)對(duì)移液器的精確性造成影響; 錯(cuò)誤：吸頭與移液器不匹配，影響氣密性;正確選用與移液器匹配、有質(zhì)量保證的吸頭; 分析：吸頭的不匹配，主要表現(xiàn)為對(duì)氣密性的影響。會(huì)直接影響移液器的精確性，通常會(huì)移液操作會(huì)小于設(shè)定量; 錯(cuò)誤：吸液時(shí)，移液器傾斜吸液; 正確：垂直吸液; 分析：傾斜的狀態(tài)會(huì)造成氣壓面的改變。會(huì)對(duì)移液精度造成影響; 錯(cuò)誤：吸頭內(nèi)含有未打出的液體時(shí)，移液器平置于桌面; 正確：將移液器垂直掛在移液器支架上; 分析：吸頭內(nèi)含有未打出液體，移液器平放之后液體有可能會(huì)流到移液器體內(nèi)部，這會(huì)對(duì)移液器內(nèi)部組件造成影響，嚴(yán)重的回造成損壞，較差污染等情況的發(fā)生; 錯(cuò)誤：用大量程的移液器移取小體積的液體; 正確：移液體積需保證在移液器所提供的量程范圍之內(nèi)才符合不準(zhǔn)確度和不精確度的要求; 分析：因?yàn)榭諝鈮|的存在，是造成移液器不準(zhǔn)確度的主要原因。移液器的選擇應(yīng)該是最大量程，最接近目的液體轉(zhuǎn)移量的選型原則; 錯(cuò)誤：吸取具有強(qiáng)揮發(fā)性的液體; 正確：不建議用普通移液器做強(qiáng)揮發(fā)型液體轉(zhuǎn)移; 分析：如果一定要移取強(qiáng)揮發(fā)性的液體，應(yīng)該在移液結(jié)束后立刻拆開移液器，讓蒸汽揮發(fā)，同時(shí)，建議使用外置活塞式移液器; 錯(cuò)誤：吸液速度和放液速度過快; 正確：慢吸慢放; 分析：快吸對(duì)于1mL及以上量程的移液器，很容易造成液體上沖，過快的放液會(huì)增加液體的殘留量。 作者：畢合生物 公眾號(hào)：畢合生物 畢合生物（www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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