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科研小努力新蟲 (小有名氣)
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PCR新手必看 已有2人參與
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最近學(xué)習(xí)定量PCR和數(shù)字PCR，然后就遇到各種PCR技術(shù)，PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR和ddPCR，有幾個長得好像，怎么區(qū)分呢？今天一舉搞定它。 01、普通PCR PCR是普通PCR，以雙鏈DNA為模板，以dNTP為底物，特異性地擴(kuò)增雙鏈DNA。然后采用瓊脂糖凝膠電泳對產(chǎn)物進(jìn)行檢測，只能做定性分析。 02、實時熒光定量PCR qPCR和Real-time PCR是實時熒光定量PCR，以cDNA為模板，以dNTP為底物，對擴(kuò)增出的DNA進(jìn)行定量分析。實時熒光定量PCR常用的方法：水解探針法和熒光染料法。 03、逆轉(zhuǎn)錄PCR RT-PCR 是逆轉(zhuǎn)錄PCR，采用 Oligo（dT） 或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，再以 cDNA 為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，結(jié)果只能定性，不能定量。 04、實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR RT-qPCR是實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR，是qPCR+RT-PCR的組合，將總RNA或mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后再作為模板，以dNTP為底物，進(jìn)行qPCR的定量分析。 05、數(shù)字PCR dPCR是數(shù)字PCR即三代PCR，是一種能夠?qū)崿F(xiàn)核酸絕對定量的精準(zhǔn)檢測技術(shù)，基于泊松分布原理將核酸樣品分配到大量獨立、平行的微反應(yīng)單元（納升級）中，使每個反應(yīng)室中平均只有一個拷貝或者沒有目標(biāo)DNA分子，然后加入熒光信號進(jìn)行擴(kuò)增，從而實現(xiàn)靶標(biāo)核酸分子的絕對計數(shù)，提高檢測靈敏度和準(zhǔn)確度。 Q 各種PCR的全稱 A: ① 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR） ②實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR） ③ 逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR） ④實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（Real-time RT-PCR，RT-qPCR） 數(shù)字PCR（Digital PCR，Dig-PCR，dPCR） |
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0405lanfeng
新蟲 (正式寫手)
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3樓2024-04-03 22:26:29
Turtle_tech
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），即DNA擴(kuò)增法，是一種用于擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。這種技術(shù)最早是在1983年被美國的mullis提出，并于1985年被發(fā)明。PCR技術(shù)從發(fā)明至今已有35年歷史，技術(shù)發(fā)展相對成熟。 PCR技術(shù)發(fā)展至今已至第三代，經(jīng)歷了定性PCR技術(shù)、定量PCR技術(shù)（qPCR）與數(shù)字PCR技術(shù)（dPCR）三個階段。不同階段的PCR技術(shù)的特點、應(yīng)用情況與行業(yè)發(fā)展情況也不盡相同。 數(shù)字PCR（digital pcr，dPCR）是20世紀(jì)90年代末發(fā)展起來的一種核酸分子絕對定量技術(shù)。dPCR檢測過程主要包括樣品的分散、PCR擴(kuò)增、熒光信號采集與數(shù)據(jù)分析。試驗結(jié)果通過對反應(yīng)單元總數(shù)和陽性反應(yīng)單元數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計，根據(jù)泊松分布公式計算出DNA模板分子的起始濃度，從而實現(xiàn)絕對定量。 數(shù)字PCR與熒光定量PCR不同點，主要體現(xiàn)在數(shù)字PCR需要進(jìn)行分區(qū)后擴(kuò)增，而熒光定量PCR是不需要分區(qū)擴(kuò)增，而這種分區(qū)即可實現(xiàn)核酸分子的單分子擴(kuò)增，單分子擴(kuò)增既可以提高擴(kuò)增效率，同時可以提高熒光檢測的靈敏性和數(shù)據(jù)的可重復(fù)性。 |
2樓2024-03-19 09:52:25
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