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科研小努力新蟲 (小有名氣)
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[交流]
蛋白 Marker遇到的問題 ？
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一、marker一定要都跑出來嗎？ 比如說說明書上市7條帶，其實(shí)跑出6條帶是正常的,可能是跑的時(shí)間不夠,如果你的蛋白不是很小的話,可以等溴酚藍(lán)前沿剛跑出膠的時(shí)候再關(guān)電泳儀,這樣應(yīng)該可以有7條帶.有的時(shí)候還會(huì)跑出5條,不過只要在你的目的蛋白的上下兩個(gè)帶都跑出來了就可以了,不一定非要7條。 二、marker變成笑臉狀怎么辦？ 第一，膠沒有壓片 第二膠在板的邊緣與中心的膠的流動(dòng)性可能不同，這個(gè)沒有辦法，跟黏度和表面張力有關(guān)。如果各種方法都不能解決上面的現(xiàn)象，個(gè)人建議maker換一條道上樣，選一條靠近中間的泳道跑一跑。 邊緣效應(yīng)，在邊緣兩個(gè)泳道的樣品會(huì)這樣的�？梢栽囋囯娪舅俣嚷c(diǎn)兒...... 要么配膠時(shí)沒壓好，膠沒配好，要么電泳時(shí)電壓太大，電滲力強(qiáng)，要么玻板電泳時(shí)沒夾好，內(nèi)電泳液是漏的，請(qǐng)逐一排查。 三、marker條帶變寬怎么解決？ 原因一：上樣量過多，應(yīng)該減少上樣量。 對(duì)策：加樣體積根據(jù)樣品濃度和凝膠厚度靈活掌握。一般上樣體積為10-15μL（即2-10μg蛋白質(zhì)）。如果樣品很稀上樣量可以達(dá)到100μL。 原因二：樣品溶解不完全。 對(duì)策：(1)樣品應(yīng)該充分溶解：保持各種蛋白質(zhì)樣品和Marker在上樣前能夠充分溶解，上樣前最好離心一下，實(shí)在溶解不掉的顆粒就去掉。 |
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