 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 618 | 回復(fù): 0 | |||
科研小努力新蟲(chóng) (小有名氣)
|
[交流]
如何培養(yǎng)貼壁細(xì)胞？
|
|
貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)要貼附于培養(yǎng)（瓶）器皿壁上，細(xì)胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展，然后開(kāi)始有絲分裂，并很快進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。貼壁細(xì)胞因其培養(yǎng)過(guò)程較為繁瑣，所以培養(yǎng)時(shí)更容易出現(xiàn)問(wèn)題。小助手總結(jié)了貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的5種問(wèn)題，并詳細(xì)介紹原因和解決方法，若培養(yǎng)時(shí)遇到這些情況，可參考對(duì)應(yīng)解決方法處理。 一、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞不貼壁 常見(jiàn)原因：胰蛋白酶消化過(guò)度；支原體污染；培養(yǎng)基pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）；細(xì)胞老化；接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。 解決方法：縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度；分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2； 啟用新的保種細(xì)胞；調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。 二、傳代后部分細(xì)胞漂浮 常見(jiàn)原因及解決方法： 1、傳代前細(xì)胞密度太大：一般細(xì)胞匯合度達(dá)到80%時(shí)可進(jìn)行傳代操作，傳代密度需適中，傳代密度過(guò)高也會(huì)導(dǎo)致傳代后漂��； 2、細(xì)胞狀態(tài)不好：可通過(guò)提高血清比例、穩(wěn)定培養(yǎng)環(huán)境等方法進(jìn)行改善； 3、吹打次數(shù)過(guò)多造成機(jī)械損傷：輕柔吹打，細(xì)胞呈單顆粒時(shí)可停止吹打，吹打過(guò)程避免氣泡產(chǎn)生； 4、培養(yǎng)基更換后不適應(yīng)：更換回原來(lái)的培養(yǎng)基；或者與原培養(yǎng)基比例混合后使用，使細(xì)胞有個(gè)適應(yīng)期。 三、傳代后細(xì)胞成團(tuán) 解決方法： 1、低密度接種，延長(zhǎng)換液時(shí)間，防止細(xì)胞脫落； 2、使用多聚賴(lài)氨酸包被培養(yǎng)器皿，以增加細(xì)胞貼壁牢固度，降低細(xì)胞聚集成團(tuán)的幾率； 3、重新鋪板，并更換新配制的培養(yǎng)基，加大血清比例（增加比例不超過(guò)5%）； 4、接種時(shí)，減少培養(yǎng)基量（如T25加3mL）以加快細(xì)胞貼壁速度，等待細(xì)胞貼壁后（約8-12小時(shí)），再補(bǔ)加培養(yǎng)基到正常用量。 四、細(xì)胞生長(zhǎng)周期變慢，邊養(yǎng)邊漂 常見(jiàn)原因及解決方法： 1、細(xì)胞傳代時(shí)密度太稀或太密：建議細(xì)胞密度達(dá)80%左右進(jìn)行傳代，傳代密度適中，密度過(guò)低會(huì)延長(zhǎng)生長(zhǎng)周期； 2、傳代操作不當(dāng)：根據(jù)細(xì)胞特性決定細(xì)胞消化時(shí)間，一般在顯微鏡下觀察細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落即可終止消化，難消化的細(xì)胞可分次消化，每次時(shí)間不超過(guò)5min；頻繁換液或者清洗細(xì)胞也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差，常規(guī)換液時(shí)間間隔為2~3天。 五、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢 常見(jiàn)原因：由于更換不同培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必須成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞；培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng)；接種細(xì)胞起始濃度太低；細(xì)胞已老化；支原體污染。 解決方法：比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子；用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；增加接種細(xì)胞起始濃度；換用新的保種細(xì)胞；分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
招調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
0703 東華大學(xué) 理學(xué)化學(xué)均過(guò) a 線(xiàn)，總分 281 求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
材料學(xué)碩318求調(diào)劑
已經(jīng)有21人回復(fù)
-
271求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
328求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
080500材料科學(xué)與工程
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
成果系統(tǒng)訪問(wèn)量大，請(qǐng)15分鐘后再?lài)L試。由此給您造成的不便，敬請(qǐng)諒解。
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
282求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
化工282求調(diào)劑一志愿211
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 科研小努力 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化工282求調(diào)劑一志愿211 +3 | NA0912 2026-03-05 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 泡了個(gè)椒 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 歡迎211本科同學(xué)，過(guò)A區(qū)國(guó)家線(xiàn)，A區(qū)非偏遠(yuǎn)一本，交叉學(xué)科課題組 +11 | lisimayy 2026-03-04 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程 求調(diào)劑 +7 | xiiiia 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 【求調(diào)劑】293分環(huán)境工程求調(diào)劑材料/化工，服從調(diào)劑，抗壓能力強(qiáng)！ +6 | xiiiia 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)312分求調(diào)劑 +3 | T123 tt 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料328求調(diào)劑 +10 | 一個(gè)蘿卜02 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩080500復(fù)試調(diào)劑294 +3 | 四葉zjz 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +7 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 學(xué)碩材料275調(diào)劑 +9 | 路三三 2026-03-03 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料專(zhuān)碩346求調(diào)劑 +3 | 旺一下 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿314求調(diào)劑 +7 | 202111120625 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料化工調(diào)劑 +15 | 今夏不夏 2026-03-01 | 18/900 |
|
|
|
[考研]
材料325求調(diào)劑
 30+5
|
mariusuki 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料工程269求調(diào)劑 +7 | 白刺玫 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +3 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +4 | Afy123456 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | BrightLL 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南理工大學(xué)材料與化工326分，求調(diào)劑 +3 | wujinrui1 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 誠(chéng)招農(nóng)業(yè)博士 +3 | 心欣向榮 2026-02-28 | 3/150 |
|