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科研小努力新蟲 (小有名氣)
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[交流]
微生物檢驗中培養(yǎng)基制備的注意事項
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配制要求 正確按要求制備培養(yǎng)基是做好微生物檢驗的基礎(chǔ)。實驗人員使用商品化脫水合成培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時，要嚴格按照產(chǎn)品說明進行配制，并做好配制記錄。在配制過程中，實驗人員需要嚴格遵守相關(guān)操作標準，佩戴口罩進行操作，避免吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末，稱量、溶解應(yīng)使用專門的角匙，不使用金屬制品，避免金屬離子混入培養(yǎng)基，影響微生物生長；準確稱量后，應(yīng)先加入適量的水充分溶解，再加水至所需量進行加熱，加熱中應(yīng)不斷攪拌，防止培養(yǎng)基在容器底部積聚；調(diào)節(jié)pH值，分裝到比培養(yǎng)基體積最少大 20%的容器中，按說明要求進行滅菌。粉末狀態(tài)的培養(yǎng)基開封后應(yīng)存放在陰涼干燥處，及時使用，環(huán)境濕度過大會使培養(yǎng)基出現(xiàn)受潮、結(jié)塊、污染等情況。對于瓊脂類培養(yǎng)基，可采用沸水浴或流動蒸汽的加熱方式進行融化，但反復(fù)凍融只允許進行1次。 配制用水 水是配制培養(yǎng)基不可或缺的一部分，一般使用純化水。還應(yīng)定期檢查培養(yǎng)基配制用水的微生物污染情況，應(yīng)符合純化水要求。 滅菌 滅菌能確保培養(yǎng)基質(zhì)量達標，實驗室常采用濕熱滅菌法，培養(yǎng)基應(yīng)按照產(chǎn)品使用說明要求進行滅菌，每次滅菌需放置壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡，驗證滅菌效果。一些培養(yǎng)基可以通過煮沸的方式進行滅菌，如結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基、亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基。實驗人員應(yīng)及時將培養(yǎng)基從滅菌鍋中取出，盡快冷卻至所需溫度，防止加熱過度，對實驗數(shù)據(jù)造成影響；要檢查培養(yǎng)基的pH值、色澤、均勻度等指標，確保符合要求后貼上標簽，標明名稱、日期、效期等基本信息。 制備 制備平板時，將滅菌后的培養(yǎng)基傾注于滅菌過的干燥平皿中，在平皿中形成至少3mm的厚度，直徑90mm的平皿通常需要加入18～20mL 的瓊脂培養(yǎng)基，需要保存或培養(yǎng)超過48h的培養(yǎng)基應(yīng)傾注更多培養(yǎng)基 。培養(yǎng)基冷卻凝固后應(yīng)立即使用或儲存，儲存時應(yīng)標記好培養(yǎng)基名稱及制備日期，密封后放置在2～8℃冰箱中。制備斜面培養(yǎng)基時，應(yīng)先將培養(yǎng)基分裝到試管中，通常每管加入10mL培養(yǎng)基，高壓滅菌，在培養(yǎng)基冷卻凝固前將試管傾斜一定角度放置，待冷卻凝固后方能使用和保存。對于液體培養(yǎng)基，根據(jù)使用要求直接分裝至三角瓶或試管中，滅菌，冷卻至室溫直接使用或保存。 培養(yǎng)基的儲存 驗收入庫的培養(yǎng)基應(yīng)嚴格按照生產(chǎn)廠家標明的儲存條件、保存期限、使用方法保存和使用。開封后的商品化脫水合成培養(yǎng)基要放置在密閉容器中保存，在瓶身注明首次開封日期 。實驗室自制培養(yǎng)基應(yīng)避光、干燥保存，需冷藏的培養(yǎng)基可放置在2～8℃冰箱中保存，平板保存時間通常為2～4 周，瓶裝及試管裝培養(yǎng)基保存時間一般為3～6個月，具體效期應(yīng)進行驗證。每次使用培養(yǎng)基前，要觀察顏色變化、流動性、均勻性、是否結(jié)塊和是否污染等情況。如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基出現(xiàn)受潮、結(jié)塊、其他性狀明顯改變的情況，應(yīng)停止使用。 |
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