 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 770 | 回復(fù): 0 | |||
科研小努力新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
巨噬細(xì)胞的提取和分離方法
|
|
· 檢測(cè)步驟 · 01、材料 昆明小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，雄性，6～8周齡。 02、肉湯制備 6%淀粉肉湯制備 將1.0g胰蛋白胨、0.3g牛肉浸膏和0.5g氯化鈉放入盛有100 mL雙蒸水的燒杯中，置于磁力攪拌器常溫溶解后121℃滅菌30min，于4℃保存。 3%巰基乙酸鹽肉湯的制備 1L雙蒸水中加入29g巰基乙酸鹽，煮沸使其完全溶解，玻璃瓶或離心管分裝后121℃滅菌15min，4℃保存，使用前確保已經(jīng)冷卻。 03、巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo) 每次腹腔注射3%巰基乙酸鹽肉湯1mL，每天1次，3d后用預(yù)冷PBS灌洗腹腔2次。 04、巨噬細(xì)胞的收集 準(zhǔn)備75%乙醇，以脫頸方式處死小鼠，浸泡3min。取出，置于無菌操作臺(tái)，仰臥位固定小鼠，右手持注射器于右下腹部將針頭刺入皮下進(jìn)入腹腔，將5mL預(yù)冷的PBS(培養(yǎng)液組為5mL預(yù)冷的10%血清ＲPMI 1640培養(yǎng)液) 注入腹腔，按摩小鼠腹部5min。無菌條件下剪開小鼠腹部皮膚顯露胸腹部，用無菌止血鉗提起劍突處組織，無菌剪刀在該處剪開約1mm2小口。注意止血鉗保持提起狀態(tài)，用無菌巴氏吸管從腹腔開口深入腹腔，反復(fù)沖洗腹膜腔灌洗液2次，可回收約8mL 淡黃色灌洗液。 05、巨噬細(xì)胞的純化與培養(yǎng) 將每只小鼠的灌洗液于常溫條件下1000r /min 離心10min，所得細(xì)胞沉淀用ＲPMI 1640培養(yǎng)液重懸接種，培養(yǎng)體系于37℃靜置培養(yǎng)2～3h后洗去未貼壁細(xì)胞，余下的貼壁細(xì)胞即為巨噬細(xì)胞。 06、巨噬細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及計(jì)數(shù) 細(xì)胞貼壁培養(yǎng)24h后在倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)。用0.5%胰酶消化細(xì)胞，離心棄上清液，PBS重懸得到細(xì)胞懸液，用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)每只小鼠腹腔中分離的巨噬細(xì)胞數(shù)量。 07、臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)巨噬細(xì)胞活性 將500μL“1.6中”的各組巨噬細(xì)胞懸液和500μL臺(tái)盼藍(lán)染液(0.4%濃度) 加入3.5cm培養(yǎng)皿，搖勻后靜置3～8min; 吸取1滴混合液滴入載玻片，3min內(nèi)鏡下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞200個(gè)，分別統(tǒng)計(jì)活/死細(xì)胞數(shù)目(死細(xì)胞呈藍(lán)色，活細(xì)胞無色透亮) ; 細(xì)胞活性(%) = 活細(xì)胞數(shù)/200×100%。每組檢測(cè)重復(fù)3次。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)材料與化工281求調(diào)劑，有科研和獲獎(jiǎng)經(jīng)歷
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
申博
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085701環(huán)境工程 求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
考研282分求調(diào)劑，接受跨專業(yè)
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿南京大學(xué)資源與環(huán)境專業(yè)283分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
歡迎211本科同學(xué)，過A區(qū)國(guó)家線，A區(qū)非偏遠(yuǎn)一本，交叉學(xué)科課題組
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
【求調(diào)劑】293分環(huán)境工程求調(diào)劑材料/化工，服從調(diào)劑，抗壓能力強(qiáng)！
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
347求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
274環(huán)境工程求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
環(huán)境工程專碩307 一志愿211 四六級(jí)已過 求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 科研小努力 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考博] 申博 +3 | 添菜了哈 2026-03-04 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[基金申請(qǐng)]
 成果系統(tǒng)訪問量大，請(qǐng)15分鐘后再嘗試。由此給您造成的不便，敬請(qǐng)諒解。
+14
|
xhuama 2026-03-02 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程求調(diào)劑 +10 | 化工人999 2026-03-04 | 10/500 |
|
|
[考研] 070300調(diào)劑一志愿南京大學(xué)化學(xué)專業(yè)，初試273分，有論文有專利有競(jìng)賽，求調(diào)劑B區(qū)211 +3 | 82206202 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，學(xué)碩，物理化學(xué)， 333求調(diào)劑 +5 | 李魔女斗篷 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大080500總分324求調(diào)劑 +3 | jorna 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601 材料工程 320 +6 | 和樂瑤 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | G212 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +8 | 路lyh123 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 266材料化工求調(diào)劑 +3 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +15 | February_Feb 2026-03-01 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 化工270求調(diào)劑 +10 | 什么名字qwq 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +6 | wyyyqx 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | repeatt?t 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料085601調(diào)劑 +5 | 多多子. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料求調(diào)劑 +4 | 麻辣魷魚 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
尋找調(diào)劑
+4
|
LYidhsjabdj 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +9 | 南迦720 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[論文投稿]
Optics letters投稿被拒求助
 30+3
|
luckyry 2026-02-26 | 4/200 |
|