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百事可愛(ài)66新蟲(chóng) (小有名氣)
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動(dòng)物實(shí)驗(yàn) | 四種腦出血?jiǎng)游镌炷７椒ǖ膬?yōu)劣盤(pán)點(diǎn)
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腦出血（intracerebral hemorrhage，ICH）目前占全部腦卒中發(fā)病的10%～20%，依靠目前的循證醫(yī)學(xué)方法，對(duì)其有用的治療手段較少。ICH患者于30d內(nèi)死亡的可能性高達(dá)35%～52%，且有80%的患者在出血后6個(gè)月時(shí)生活仍不能自理。ICH的致死致殘率很高，且目前治療中能提升患者生存率以及提高出血后生活質(zhì)量的較少。因此，構(gòu)建能夠模擬疾病發(fā)生發(fā)展的動(dòng)物模型極為重要。 動(dòng)物的選擇 大鼠、小鼠、兔、猴、狗、豬。其中，SD大鼠是目前最常用的腦出血實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，其優(yōu)勢(shì)是價(jià)格低廉、容易飼養(yǎng)，可以選取大樣本實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較可靠，且大鼠相對(duì)于大動(dòng)物而言，形體較小，可控性強(qiáng)。人類腦出血的常見(jiàn)位置為尾狀核，而大鼠的尾狀核是腦內(nèi)最大核團(tuán)，較易觀察大腦的生理病理變化，所以用大鼠制作腦出血模型能較好地模擬人類腦出血部位。 造模方法 目前開(kāi)展科學(xué)研究的常用腦出血模型包括四種：膠原酶注射腦出血模型，自體血注入腦出血模型，微球囊充盈腦出血模型，高血壓性腦出血模型。 一、腦出血模型 1.膠原酶注射腦出血模型 膠原酶分為多型，目前研究認(rèn)為Ⅳ型和Ⅶ型用于腦出血建模最恰當(dāng)。 造模方法：SD 大鼠麻醉消毒后固定，顱骨轉(zhuǎn)孔，使用立體定位儀定位大鼠腦一側(cè)尾狀核，將微量注射器針頭插入腦組織尾狀核，分別分組注入0.5μL膠原酶，連續(xù)觀察10 min后即可見(jiàn)發(fā)生出血，且出血后癥狀明顯、持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。 優(yōu)點(diǎn)：方法簡(jiǎn)單、快捷、成功率較高，出血穩(wěn)定性好，并可多次重復(fù)；其能較好地模擬人體腦血管自發(fā)出血的生理生化過(guò)程以及出血后血腫持續(xù)擴(kuò)大的病理變化過(guò)程。 缺點(diǎn)：膠原酶并不能造成血管的物理性破裂，實(shí)際上是造成了小血管的廣泛慢性滲血，形成的血液滲出灶并不是真正意義上的局限的血腫，急性占位效應(yīng)不明顯，與人類腦出血的病理過(guò)程仍有區(qū)別。另外，膠原酶本身可造成腦組織嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，并且對(duì)血管有廣泛的破壞作用，這些不良作用可對(duì)腦出血后單純由血腫形成的炎癥反應(yīng)研究產(chǎn)生干擾。另外，膠原酶對(duì)腦組織有細(xì)胞毒性作用，可嚴(yán)重?fù)p傷神經(jīng)功能及血腦屏障，因此并不能完全模擬人類單純腦出血后二次損傷的病理生理狀態(tài)，不能用來(lái)研究腦出血后血腫周圍組織血液循環(huán)障礙，有一定的局限性。 應(yīng)用：適用于評(píng)估腦出血后各類指標(biāo)的長(zhǎng)期觀察。 2.自體血局部注入法 ①單步注射法 該方法是抽取動(dòng)物自身一定量血液通過(guò)定位技術(shù)注入該動(dòng)物腦尾狀核造成該部位血腫的一種建模方法，自體血尾狀核注射腦出血模型是目前較為理想的腦出血模型。 造模方法：麻醉并固定動(dòng)物后，動(dòng)物顱骨局部轉(zhuǎn)孔，取選定腦組織局部注射動(dòng)物非肝素化自體血，注血量與動(dòng)物腦組織大小相關(guān)（鼠腦注血量分別為25 μl、50 μl和100 μl，分別相當(dāng)于人腦20 ml、40 ml和80 ml的出血量）。 但是自體血注入法存在注血過(guò)程中血液逆流現(xiàn)象，影響了血腫大小形成的穩(wěn)定性。由于尾狀核較為致密，注血時(shí)局部壓力較高，而新鮮凝固的血塊強(qiáng)度很低，很難抵抗血腫膨脹的壓力，無(wú)法從根本上解決血液逆流的難題。 優(yōu)點(diǎn)：由于造模方法操作簡(jiǎn)單，特別是應(yīng)用立體定向儀后，動(dòng)物的死亡率明顯降低，且血腫位置更加精確，除有不可避免的穿刺針道損傷外無(wú)其他異體物質(zhì)和雜質(zhì)，故該模型的病理過(guò)程更接近人的自發(fā)性腦出血。 缺點(diǎn)：模型都不能呈現(xiàn)良好的可重復(fù)性，且造成的血腫體積不穩(wěn)定，成功率較低，同時(shí)有出現(xiàn)腦室及硬膜下間隙之間破裂出血和注射的血液返流等情況。 ②兩步注射法 由于單步注射法存在較多的缺陷，現(xiàn)在常用的方法是兩步注射法，提高了成功率的同時(shí)減少了血液的返流。 造模方法：先注射15 μL自體血，后靜置針頭7 min，使血凝塊形成將針道封堵，再注射余下35 μL。 優(yōu)點(diǎn)：除了一步注射法的優(yōu)點(diǎn)外，還能有效地減少針道反流的血量，較好地控制了血腫的大小、形態(tài)及部位。并且可以觀察血液凝固過(guò)程中局部腦組織的病理生理變化，此方法與人腦出血后演進(jìn)過(guò)程基本相似，可用于研究腦水腫機(jī)制及臨床藥物作用機(jī)制。 缺點(diǎn)：注入腦內(nèi)的血腫并非血管破裂造成的。血液注射過(guò)程中不可避免地有反溢現(xiàn)象和血液凝固堵塞針道的問(wèn)題，血腫形態(tài)和大小重復(fù)性差。 注意：自體血常取材于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的內(nèi)眥、股動(dòng)脈、心臟等處。內(nèi)眥取血血液標(biāo)本不易被污染，但取血為靜脈血，與腦動(dòng)脈出血的血液成分不符。動(dòng)脈穿刺法血液成分與腦出血成分較一致。但股動(dòng)脈穿刺法操作較復(fù)雜，成功率低。心臟穿刺法同樣可以得到純凈的動(dòng)脈血，操作較簡(jiǎn)便，損傷較小，但對(duì)操作人員技術(shù)要求較高，需熟練的操作技巧，反復(fù)穿刺動(dòng)物又容易導(dǎo)致動(dòng)物失血、感染死亡。 3.自發(fā)性腦出血法 此模型是研究成人型腦出血較理想的模型。 目前有實(shí)驗(yàn)采用基因培育方法培育出具有易出血的高血壓基因動(dòng)物，該動(dòng)物自出生起數(shù)周開(kāi)始血壓自發(fā)升高，短時(shí)間內(nèi)可發(fā)生自發(fā)性腦出血。這類動(dòng)物也常用大鼠，是在已有高血壓基因大鼠的基礎(chǔ)上近親繁殖培育，其相對(duì)于祖代血壓更高，自發(fā)性腦出血發(fā)生率達(dá)80% ，發(fā)生出血的部位主要在大腦前內(nèi)側(cè)皮質(zhì)、枕皮質(zhì)和基底節(jié)。 優(yōu)點(diǎn)：此模型將高血壓與腦卒中結(jié)合，相似度極高地模擬人腦卒中病理。 缺點(diǎn)：這類動(dòng)物只代表腦出血的一小部分原因—高血壓，且動(dòng)物培養(yǎng)成本高昂，繁育時(shí)間較長(zhǎng)，動(dòng)物體弱飼養(yǎng)困難，繁育的后代模型容易出現(xiàn)斷種、變種、基因突變的情況，應(yīng)用受到一定限制。 4.微球囊充脹法 造模方法：先將大鼠顱骨特定部位轉(zhuǎn)孔，然后將固定在針頭部位的微球囊通過(guò)該孔插入大腦尾狀核頭部，在20s內(nèi)注入微球囊50mL液體，保留10min，觀察微球囊對(duì)腦組織的壓迫作用，然后回抽微球囊內(nèi)液體，通過(guò)不斷變化微球囊體積模擬不同大小血腫對(duì)腦組織的壓迫作用。 缺點(diǎn)：微球囊并非血液成分，研究者并沒(méi)有考慮腦出血后血腫的血液成分對(duì)腦組織的細(xì)胞毒性作用，血腫的腦細(xì)胞毒性作用的研究是人類需要解決的重要問(wèn)題，因此近年來(lái)的腦出血研究基本上已摒棄了此方法。 總結(jié) 無(wú)論哪種方法建立動(dòng)物腦出血模型均存在各自的優(yōu)缺點(diǎn)。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及各種新技術(shù)的不斷發(fā)展，許多新的腦出血建模方法不斷出現(xiàn)，但仍有缺陷，需要不斷的研究和改進(jìn)。建立標(biāo)準(zhǔn)化腦出血?jiǎng)游锬Ｐ鸵殉蔀檠芯空吖餐非蟮哪繕?biāo)，建模過(guò)程的各處理因素和影響因素統(tǒng)一化，減少對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，盡可能與人類腦出血的發(fā)病過(guò)程、病理生理過(guò)程趨向一致將是一個(gè)長(zhǎng)期探索的過(guò)程。 來(lái)源： 1. 醫(yī)學(xué)綜述,2020 2. 中華神經(jīng)創(chuàng)傷外科電子雜志,2015 |
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