 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 495 | 回復(fù): 0 | |||
百事可愛66新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
細(xì)胞實驗 | 脂肪組織中分離巨噬細(xì)胞，小助手來支招啦！
|
|
實驗步驟 01 分離 •用PBS清洗脂肪組織，并將組織放在冰上的培養(yǎng)皿中，用剪刀將組織切成小塊（約3-5mm）。 •將切碎的組織轉(zhuǎn)移到含有7ml冰冷消化緩沖液的10ml圓底管中，此操作需一直保持在冰上。對于>1g的脂肪，將組織切碎并轉(zhuǎn)移到含有10ml冰冷消化緩沖液的50ml錐形管中。 •加入1ml（如脂肪組織重量>1g則可以增加至1.5ml）10× 膠原酶緩沖液，并加入消化緩沖液使得膠原酶的最終濃度為1mg/ml。 •在37°C下孵育半小時，且使試管劇烈搖晃。每10分鐘大力搖動試管，可獲得更高的細(xì)胞產(chǎn)量。30分鐘后，取10µl產(chǎn)物進(jìn)行顯微鏡觀察，此時，脂肪細(xì)胞應(yīng)顯示為大的單細(xì)胞，白細(xì)胞和其他基質(zhì)細(xì)胞會小得多。如果白細(xì)胞仍附著在脂肪細(xì)胞上，則應(yīng)繼續(xù)消化；如果沒有，請繼續(xù)下一步。 •消化后，將EDTA添加到10 mM的最終濃度，并在37°C下再孵育10分鐘。 02 過濾 •用 PBS預(yù)濕100 µm尼龍過濾器，然后放置在50ml錐形管上。使用移液管，將前述樣本的細(xì)胞沉淀先轉(zhuǎn)移到過濾器上過濾，然后再過濾含有脂肪細(xì)胞的上層。 •加入10 ml FACS 緩沖液輕輕清洗過濾器兩次。 03 離心 •在4 °C下以500×g 離心10分鐘以分離脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。離心后，脂肪細(xì)胞在頂部形成白色層，而巨噬細(xì)胞等其它細(xì)胞在管底部形成紅色或白色沉淀。 •輕輕吸出并丟棄脂肪細(xì)胞和上清液。此時，含有巨噬細(xì)胞的團(tuán)塊很容易受到干擾，因此應(yīng)格外小心。 04 獲取巨噬細(xì)胞 •通過輕彈試管將沉淀重懸于0.5 ml紅細(xì)胞裂解液中。在室溫下孵育5分鐘，偶爾輕輕搖晃。 •通過添加5 ml FACS緩沖液，中和紅細(xì)胞裂解作用。 •在4 °C下以500×g 離心10分鐘。 •在3–5 ml FACS緩沖液中重懸細(xì)胞沉淀并在冰上孵育。 05 巨噬細(xì)胞計數(shù) •將10 µl每個樣品1:1與臺盼藍(lán)溶液混合。使用血細(xì)胞計數(shù)板仔細(xì)計數(shù)活細(xì)胞。根據(jù)計數(shù)得到的細(xì)胞數(shù)量，結(jié)合獲得的樣本總體積，可計算出每份脂肪組織巨噬細(xì)胞產(chǎn)量。典型的產(chǎn)量：瘦小鼠一般為1-3×1000000個細(xì)胞/g脂肪，肥胖小鼠一般為2-5×1000000個細(xì)胞/g脂肪。 注意事項 1、盡可能切碎組織，在消化過程中頻繁手動搖動增加接觸面積。 2、膠原酶消化脂肪組織時，碎組織大小、搖動強(qiáng)度和孵育時間是關(guān)鍵參數(shù)，應(yīng)對其進(jìn)行優(yōu)化，以最大限度地提高從脂肪提取巨噬細(xì)胞的產(chǎn)量。 3、膠原酶的消化時間應(yīng)根據(jù)每批膠原酶分別進(jìn)行優(yōu)化。增加膠原酶緩沖液中的孵育時間，尤其是超過1小時，會顯著降低細(xì)胞產(chǎn)量并增加細(xì)胞死亡幾率。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機(jī)械電子信息通信等交叉方向
已經(jīng)有22人回復(fù)
-
招調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
0703 東華大學(xué) 理學(xué)化學(xué)均過 a 線，總分 281 求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
材料學(xué)碩318求調(diào)劑
已經(jīng)有21人回復(fù)
-
271求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
328求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
080500材料科學(xué)與工程
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
成果系統(tǒng)訪問量大，請15分鐘后再嘗試。由此給您造成的不便，敬請諒解。
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
282求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 百事可愛66 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化工282求調(diào)劑一志愿211 +3 | NA0912 2026-03-05 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +3 | Trying] 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | 李LJR 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 歡迎211本科同學(xué)，過A區(qū)國家線，A區(qū)非偏遠(yuǎn)一本，交叉學(xué)科課題組 +11 | lisimayy 2026-03-04 | 21/1050 |
|
|
|
[基金申請]
 本子寫完了，給DS兄弟看了，得了92分
+6
|
Doma 2026-03-01 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)312分求調(diào)劑 +3 | T123 tt 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工，291分，求調(diào)劑 +9 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-04 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 085600 材料與化工 298 +14 | 小西笑嘻嘻 2026-03-03 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 將未有期 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0854總分272 +5 | 打小就是老實人 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 280分 +10 | yyqqhh 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料工程求調(diào)劑 +3 | 1431251 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +6 | wyyyqx 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工京區(qū)271求調(diào)劑 +7 | 11ing 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 【2026 碩士調(diào)劑】課題組 招收調(diào)劑生 +3 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料調(diào)劑 +5 | 沿岸有貝殼OUC 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程274求調(diào)劑 +5 | Lilithan 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +5 | 2026計算機(jī)_誠心 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +3 | cgyzqwn 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +9 | 南迦720 2026-02-28 | 10/500 |
|