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干貨分享 | 微生物檢驗(yàn)中培養(yǎng)基制備的注意事項(xiàng)
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培養(yǎng)基的概述 培養(yǎng)基是用于保證微生物繁殖、鑒定、保持活力的物質(zhì)，按照物理性質(zhì)可以分成液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基，按照化學(xué)性質(zhì)可以分成天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基，按照功能可以分成選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。不同培養(yǎng)基要求不同，保存方式也不同。在受熱、吸潮后，培養(yǎng)基極易被微生物污染或分解變質(zhì)，需在避光、防潮、陰涼處儲(chǔ)存。 培養(yǎng)基的采購(gòu)驗(yàn)收 微生物檢驗(yàn)需使用大量培養(yǎng)基。為提高檢驗(yàn)效率，實(shí)驗(yàn)室多使用商品化即用型培養(yǎng)基、商品化脫水合成培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基的采購(gòu)中，應(yīng)選擇國(guó)內(nèi)、外知名商家的產(chǎn)品，并向生產(chǎn)企業(yè)索要培養(yǎng)基成分名稱、產(chǎn)品編號(hào)、批號(hào)、最終 pH值、儲(chǔ)存條件、生產(chǎn)日期、有效期、質(zhì)控報(bào)告和必要的相關(guān)信息，以保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。在產(chǎn)品交貨驗(yàn)收時(shí)，購(gòu)買者需對(duì)產(chǎn)品包裝的完整性、生產(chǎn)日期、有效期和產(chǎn)品合格證明等進(jìn)行核驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基的顏色、性質(zhì)等是否符合實(shí)驗(yàn)室相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基檢驗(yàn)合格后進(jìn)行入庫(kù)登記。 培養(yǎng)基的制備 配制要求 正確按要求制備培養(yǎng)基是做好微生物檢驗(yàn)的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)人員使用商品化脫水合成培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時(shí)，要嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明進(jìn)行配制，并做好配制記錄。在配制過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)人員需要嚴(yán)格遵守相關(guān)操作標(biāo)準(zhǔn)，佩戴口罩進(jìn)行操作，避免吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末，稱量、溶解應(yīng)使用專門的角匙，不使用金屬制品，避免金屬離子混入培養(yǎng)基，影響微生物生長(zhǎng)；準(zhǔn)確稱量后，應(yīng)先加入適量的水充分溶解，再加水至所需量進(jìn)行加熱，加熱中應(yīng)不斷攪拌，防止培養(yǎng)基在容器底部積聚；調(diào)節(jié)pH值，分裝到比培養(yǎng)基體積最少大 20%的容器中，按說(shuō)明要求進(jìn)行滅菌。粉末狀態(tài)的培養(yǎng)基開封后應(yīng)存放在陰涼干燥處，及時(shí)使用，環(huán)境濕度過(guò)大會(huì)使培養(yǎng)基出現(xiàn)受潮、結(jié)塊、污染等情況。對(duì)于瓊脂類培養(yǎng)基，可采用沸水浴或流動(dòng)蒸汽的加熱方式進(jìn)行融化，但反復(fù)凍融只允許進(jìn)行1次。 配制用水 水是配制培養(yǎng)基不可或缺的一部分，一般使用純化水。還應(yīng)定期檢查培養(yǎng)基配制用水的微生物污染情況，應(yīng)符合純化水要求。 滅菌 滅菌能確保培養(yǎng)基質(zhì)量達(dá)標(biāo)，實(shí)驗(yàn)室常采用濕熱滅菌法，培養(yǎng)基應(yīng)按照產(chǎn)品使用說(shuō)明要求進(jìn)行滅菌，每次滅菌需放置壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡，驗(yàn)證滅菌效果。一些培養(yǎng)基可以通過(guò)煮沸的方式進(jìn)行滅菌，如結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基、亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)及時(shí)將培養(yǎng)基從滅菌鍋中取出，盡快冷卻至所需溫度，防止加熱過(guò)度，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)造成影響；要檢查培養(yǎng)基的pH值、色澤、均勻度等指標(biāo)，確保符合要求后貼上標(biāo)簽，標(biāo)明名稱、日期、效期等基本信息。 制備 制備平板時(shí)，將滅菌后的培養(yǎng)基傾注于滅菌過(guò)的干燥平皿中，在平皿中形成至少3mm的厚度，直徑90mm的平皿通常需要加入18～20mL 的瓊脂培養(yǎng)基，需要保存或培養(yǎng)超過(guò)48h的培養(yǎng)基應(yīng)傾注更多培養(yǎng)基 。培養(yǎng)基冷卻凝固后應(yīng)立即使用或儲(chǔ)存，儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)標(biāo)記好培養(yǎng)基名稱及制備日期，密封后放置在2～8℃冰箱中。制備斜面培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)先將培養(yǎng)基分裝到試管中，通常每管加入10mL培養(yǎng)基，高壓滅菌，在培養(yǎng)基冷卻凝固前將試管傾斜一定角度放置，待冷卻凝固后方能使用和保存。對(duì)于液體培養(yǎng)基，根據(jù)使用要求直接分裝至三角瓶或試管中，滅菌，冷卻至室溫直接使用或保存。 培養(yǎng)基的儲(chǔ)存 驗(yàn)收入庫(kù)的培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格按照生產(chǎn)廠家標(biāo)明的儲(chǔ)存條件、保存期限、使用方法保存和使用。開封后的商品化脫水合成培養(yǎng)基要放置在密閉容器中保存，在瓶身注明首次開封日期 。實(shí)驗(yàn)室自制培養(yǎng)基應(yīng)避光、干燥保存，需冷藏的培養(yǎng)基可放置在2～8℃冰箱中保存，平板保存時(shí)間通常為2～4 周，瓶裝及試管裝培養(yǎng)基保存時(shí)間一般為3～6個(gè)月，具體效期應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。每次使用培養(yǎng)基前，要觀察顏色變化、流動(dòng)性、均勻性、是否結(jié)塊和是否污染等情況。如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基出現(xiàn)受潮、結(jié)塊、其他性狀明顯改變的情況，應(yīng)停止使用。 |
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