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干貨分享 | 微生物檢驗中培養(yǎng)基制備的注意事項
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培養(yǎng)基的作用是為微生物提供生長和繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。培養(yǎng)基的質(zhì)量直接關系到檢驗結(jié)果的準確性和可靠性，因此對于微生物檢驗而言，培養(yǎng)基的質(zhì)量控制尤為重要。培養(yǎng)基的主要作用有兩方面：①提供微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)；②培養(yǎng)基具有選擇性和差異性，可以選擇特定類型的細菌或真菌進行培養(yǎng)，并區(qū)分不同種類的微生物。因此，在微生物檢驗中，必須對培養(yǎng)基進行嚴格的質(zhì)量控制，只有優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)基才能為微生物檢驗提供精準、可靠的檢測結(jié)果。 培養(yǎng)基的概述 培養(yǎng)基是用于保證微生物繁殖、鑒定、保持活力的物質(zhì)，按照物理性質(zhì)可以分成液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基，按照化學性質(zhì)可以分成天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基，按照功能可以分成選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。不同培養(yǎng)基要求不同，保存方式也不同。在受熱、吸潮后，培養(yǎng)基極易被微生物污染或分解變質(zhì)，需在避光、防潮、陰涼處儲存。 培養(yǎng)基的采購驗收 微生物檢驗需使用大量培養(yǎng)基。為提高檢驗效率，實驗室多使用商品化即用型培養(yǎng)基、商品化脫水合成培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基的采購中，應選擇國內(nèi)、外知名商家的產(chǎn)品，并向生產(chǎn)企業(yè)索要培養(yǎng)基成分名稱、產(chǎn)品編號、批號、最終 pH值、儲存條件、生產(chǎn)日期、有效期、質(zhì)控報告和必要的相關信息，以保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。在產(chǎn)品交貨驗收時，購買者需對產(chǎn)品包裝的完整性、生產(chǎn)日期、有效期和產(chǎn)品合格證明等進行核驗，檢查培養(yǎng)基的顏色、性質(zhì)等是否符合實驗室相關標準，培養(yǎng)基檢驗合格后進行入庫登記。 培養(yǎng)基的制備 配制要求 正確按要求制備培養(yǎng)基是做好微生物檢驗的基礎。實驗人員使用商品化脫水合成培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時，要嚴格按照產(chǎn)品說明進行配制，并做好配制記錄。在配制過程中，實驗人員需要嚴格遵守相關操作標準，佩戴口罩進行操作，避免吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末，稱量、溶解應使用專門的角匙，不使用金屬制品，避免金屬離子混入培養(yǎng)基，影響微生物生長；準確稱量后，應先加入適量的水充分溶解，再加水至所需量進行加熱，加熱中應不斷攪拌，防止培養(yǎng)基在容器底部積聚；調(diào)節(jié)pH值，分裝到比培養(yǎng)基體積最少大 20%的容器中，按說明要求進行滅菌。粉末狀態(tài)的培養(yǎng)基開封后應存放在陰涼干燥處，及時使用，環(huán)境濕度過大會使培養(yǎng)基出現(xiàn)受潮、結(jié)塊、污染等情況。對于瓊脂類培養(yǎng)基，可采用沸水浴或流動蒸汽的加熱方式進行融化，但反復凍融只允許進行1次。 配制用水 水是配制培養(yǎng)基不可或缺的一部分，一般使用純化水。還應定期檢查培養(yǎng)基配制用水的微生物污染情況，應符合純化水要求。 滅菌 滅菌能確保培養(yǎng)基質(zhì)量達標，實驗室常采用濕熱滅菌法，培養(yǎng)基應按照產(chǎn)品使用說明要求進行滅菌，每次滅菌需放置壓力蒸汽滅菌化學指示卡，驗證滅菌效果。一些培養(yǎng)基可以通過煮沸的方式進行滅菌，如結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基、亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基。實驗人員應及時將培養(yǎng)基從滅菌鍋中取出，盡快冷卻至所需溫度，防止加熱過度，對實驗數(shù)據(jù)造成影響；要檢查培養(yǎng)基的pH值、色澤、均勻度等指標，確保符合要求后貼上標簽，標明名稱、日期、效期等基本信息。 制備 制備平板時，將滅菌后的培養(yǎng)基傾注于滅菌過的干燥平皿中，在平皿中形成至少3mm的厚度，直徑90mm的平皿通常需要加入18～20mL 的瓊脂培養(yǎng)基，需要保存或培養(yǎng)超過48h的培養(yǎng)基應傾注更多培養(yǎng)基 。培養(yǎng)基冷卻凝固后應立即使用或儲存，儲存時應標記好培養(yǎng)基名稱及制備日期，密封后放置在2～8℃冰箱中。制備斜面培養(yǎng)基時，應先將培養(yǎng)基分裝到試管中，通常每管加入10mL培養(yǎng)基，高壓滅菌，在培養(yǎng)基冷卻凝固前將試管傾斜一定角度放置，待冷卻凝固后方能使用和保存。對于液體培養(yǎng)基，根據(jù)使用要求直接分裝至三角瓶或試管中，滅菌，冷卻至室溫直接使用或保存。 培養(yǎng)基的儲存 驗收入庫的培養(yǎng)基應嚴格按照生產(chǎn)廠家標明的儲存條件、保存期限、使用方法保存和使用。開封后的商品化脫水合成培養(yǎng)基要放置在密閉容器中保存，在瓶身注明首次開封日期 。實驗室自制培養(yǎng)基應避光、干燥保存，需冷藏的培養(yǎng)基可放置在2～8℃冰箱中保存，平板保存時間通常為2～4 周，瓶裝及試管裝培養(yǎng)基保存時間一般為3～6個月，具體效期應進行驗證。每次使用培養(yǎng)基前，要觀察顏色變化、流動性、均勻性、是否結(jié)塊和是否污染等情況。如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基出現(xiàn)受潮、結(jié)塊、其他性狀明顯改變的情況，應停止使用。 |
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