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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 細胞科學 » 細胞劃痕實驗
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細胞劃痕實驗
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細胞劃痕實驗（Wound Healing)是一種操作簡單，經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。這種方法的原理是，當細胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”愈合�；镜牟襟E包括“劃痕”的制造，細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。特點： 1，在一定程度上模擬了體內細胞遷移的過程。2, 非常適合研究細胞與胞外基質（ECM），細胞與細胞之間相互作用引起的細胞 遷移。3，與包括活細胞成像在內的顯微鏡系統(tǒng)兼容，可用于分析細胞間的相互作用。4，研究細胞遷移的體外實驗中最簡單的方法。 傳統(tǒng)實驗方法 實驗步驟：1，培養(yǎng)板接種細胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標記（方便拍照時定位同一 個視野）。2，細胞消化后接入12孔板，數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜（數(shù)量少時可培養(yǎng)一段時間至鋪滿板底）。3, 細胞鋪滿板底后，用1ml槍頭垂直于孔板制造細胞劃痕，盡量保證各個劃痕寬度一致。（人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性，影響實驗結果，這也是該方法最大的缺陷。）4，吸去細胞培養(yǎng)液，用PBS沖洗孔板三次，洗去劃痕產(chǎn)生的細胞碎片。5，加入無血清培養(yǎng)基，拍照記錄。6，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每隔4-6小時取出拍照。7，根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結果。德國IBIDI（易必迪）公司Culture Insert方法 1，準備細胞，培養(yǎng)液，culture Insert。2，如圖，將細胞接種于Dish中間的Insert，細胞長滿Insert 區(qū)域后用鑷子移除Insert即可產(chǎn)生500μm寬度的劃痕。3，每隔4-6小時拍照記錄。4，根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結果。 實驗原理示意圖 總結：相比較于傳統(tǒng)的劃痕實驗，Ibidi的設計更科學、重現(xiàn)性更好。 作者：畢合生物 公眾號：畢合生物 畢合生物(www.bihebio.com)提供服務內容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關、生命科學、天然產(chǎn)物 |
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