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實(shí)驗(yàn)室常用實(shí)驗(yàn)方法介紹--濃縮法介紹
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一、沉淀法 在抽提液中加入適量的中性鹽或有機(jī)溶劑,使有效成分變?yōu)槌恋�。�?jīng)離心除去不溶物,獲得的上清液通過透析或凝膠過濾脫鹽,即可供純化使用。 二、吸附法 將干葡聚糖凝膠G25(或吸水棒)加入抽提液中,兩者比例為1:5。由于凝膠吸水之故,抽提液的體積可縮小三倍左右,回收蛋白質(zhì)量約80%.若凝膠(或吸水棒)對有效成分吸附力強(qiáng)或吸水后有效成分的性質(zhì)有影響時(shí),此法不宜采用。 三、超過濾法 把抽提液裝入超過濾裝置,在空氣或氮?dú)?5.05×105Pa)壓力下,使小分子物質(zhì)(包括水分)通過半透膜(如硝酸纖維素膜),大分子物質(zhì)留在膜內(nèi)。 四、透析法 把裝抽提液的透析袋埋在吸水力強(qiáng)的聚乙二醇(polyetheylene glycol PEG 分子質(zhì)量大于20kDa)或甘油中,10ml抽提液可在1h內(nèi)濃縮到幾乎無水的程度。 五、減壓蒸餾法 將抽提液裝入減壓蒸餾器的圓底燒瓶中,在減壓真空狀態(tài)下進(jìn)行蒸餾。當(dāng)真空度較高時(shí)溶液的沸點(diǎn)可控制在30℃以下。這種方法一般適用于常溫下穩(wěn)定性好的物質(zhì)。 六、冰凍干燥法 冰凍的抽提液在真空狀態(tài)下,可以由固體直接變?yōu)闅怏w。用此原理進(jìn)行濃縮,有效成分幾乎不會破壞。凍干機(jī)主要由低溫干燥箱、真空泵和冷凍機(jī)構(gòu)成。在凍干小體積樣品時(shí),可以將其置玻璃真空干燥器中進(jìn)行。具體作法是,把分裝至小瓶中的樣品冰凍后放入裝有五氧化二磷或硅膠吸水劑的真空干燥器中,連續(xù)抽真空使其達(dá)到濃縮、干燥狀態(tài)。 上述的濃縮方法(除第五種外),一般都在低溫進(jìn)行。這些方法不僅適用于抽提液的濃縮處理,而且也適用于純品溶液縮小體積。 作者：畢合生物 公眾號：畢合生物 畢合生物(www.bihebio.com)提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
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