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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » DNA重組 » 測序一直錯誤
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&夏至新蟲 (初入文壇)
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[交流]
測序一直錯誤 已有5人參與
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最近在把一段400bp左右的片段連接到載體上，用的是無縫克隆連接的，第一次連接完去測序，六個樣品，每個都出現堿基缺失或者堿基錯誤，還都發(fā)生在中間部位，有的在同源臂連接部分，有的在序列中間，（錯誤都不在測序前后100bp內），換了一家無縫克隆的試劑盒（諾唯贊的）重新做了一次，最后取PCR產物去測序，結果又在不同的關鍵部位有堿基錯誤，每一個測序樣品都是。實驗做PCR全程用的高保真酶，現在不知道怎么辦了以前做無縫克隆從來沒有出現過這樣的情況啊有沒有大佬給指導一下啊 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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&夏至
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10樓2023-05-30 13:39:19
yudaoqian88
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1，你可以找小伙伴順帶幫你做一遍，看結果是否一樣。2，多個樣品出現序列與參考序列不一致，考慮是不是序列本身就是這樣的�？梢园褍纱蔚臏y序結果進行比對，看錯誤匹配處堿基是否一致，如果是一樣的，那表明你所用材料里的目標序列就是這樣的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2023-05-25 22:25:58
shuaibia6
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3樓2023-05-26 08:48:38
&夏至
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4樓2023-05-26 11:13:05
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