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百螢 Cell Meter PE Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒 適用于流式細胞儀
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1.百螢 Cell Meter PE Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒概述 Cell Meter PE-Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測細胞凋亡的試劑盒，膜聯(lián)蛋白V可以與包括PE的熒光染料結合。該染料保留了其對磷脂酰絲氨酸（PS）的高親和力，因此可用作流式細胞術分析正在經(jīng)歷細胞凋亡的細胞的敏感探針。由于PS的外化發(fā)生在細胞凋亡的早期階段，PE膜聯(lián)蛋白V染色可以比基于核變化（例如DNA片段化）的測定更早地鑒定細胞凋亡。 PE膜聯(lián)蛋白V染色先于膜完整性的喪失，膜完整性伴隨由凋亡或壞死過程導致的最新細胞死亡階段。因此，用PE膜聯(lián)蛋白V染色通常與碘化丙啶（PI）或7-氨基 - 放線菌素（7-AAD）等活體染料結合使用，使研究者能夠鑒別早期凋亡細胞（7-AAD陰性，PE膜聯(lián)蛋白V陽性）。具有完整膜的存活細胞排除7-AAD，而死亡和受損細胞的膜可透過7-AAD。例如，被認為存活的細胞既是PE膜聯(lián)蛋白V也是7-AAD陰性的，而處于早期凋亡的細胞是PE膜聯(lián)蛋白V陽性和7-AAD陰性，而處于晚期凋亡或已經(jīng)死亡的細胞都是PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽性。該測定法不區(qū)分經(jīng)歷凋亡性死亡的細胞與因壞死性通路而死亡的細胞，因為在任一情況下，死亡細胞都將用PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD染色。然而，當隨著時間測量細胞凋亡時，可以經(jīng)常從PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陰性（可行的，或不可測量的細胞凋亡）追蹤細胞至PE膜聯(lián)蛋白V陽性和7-AAD陰性（早期凋亡，膜完整性存在），最后是PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽性（末期凋亡和死亡）。細胞通過這三個階段的運動表明細胞凋亡。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質的Cell Meter PE-Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒。 2.百螢 Cell Meter PE Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒適用儀器 流式細胞儀 E x: 488nm or 561nm E m: 575/26nm 通 道: PE通道 3.百螢 Cell Meter PE Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒實驗方案 簡要概述 （1）用測試化合物（200μL/樣品）制備細胞 （2）添加RPE-膜聯(lián)蛋白V測定溶液 （3）在室溫下孵育20-60分鐘 （4）使用FL2通道（Ex / Em = 488/585 nm）用流式細胞儀分析細胞 儲備溶液配制 除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復凍融循環(huán)。 RPE-Annexin V原液（100X）： 將含有0.2％BSA的200μLPBS加入到RPE-膜聯(lián)蛋白V（組分A）的小瓶中以制備100X RPE-膜聯(lián)蛋白V儲備溶液。 注意：將重構的100X RPE-Annexin V儲備溶液儲存在4°C。 操作步驟 A.用測試化合物處理細胞一段所需的時間（用星形孢菌素處理的Jurkat細胞4-6小時）以誘導細胞凋亡。注意：膜粘附細胞的膜聯(lián)蛋白V流式細胞術分析未經(jīng)常檢測，因為在細胞分離或收獲期間可能發(fā)生特定的膜損傷。然而，Casiola-Rosen等人先前報道了利用膜聯(lián)蛋白V對貼壁細胞類型進行流式細胞術的方法。 B.離心細胞，得到1-5×105個細胞/管。 C.將細胞重懸于200μL測定緩沖液（組分B）中。 D.向細胞中加入2μL100XRPE-膜聯(lián)蛋白V原液。 E.可選：為壞死細胞添加2μL100XNuclear Red DCS（成分C）。 F在室溫下孵育20至60分鐘，避光。 G可選：在使用流式細胞儀分析細胞之前，添加200至300μL的測定緩沖液（組分B）以增加體積。 H.使用具有FL2通道的流式細胞儀（Ex / Em = 488 / 585nm）監(jiān)測RPE-膜聯(lián)蛋白V的熒光強度。當將Nuclear Red DCS添加到細胞中時，使用FL4通道測量細胞活力。 4.參考文獻 Apoptosis of human Burkitt's lymphoma cells induced by 2-N,N-diethylaminocarbonyloxymethyl-1-diphenylmethyl-4-(3,4,5-trimethoxybe nzoyl) piperazine hydrochloride (PMS-1077) Authors: Wang WD, Xu XM, Chen Y, Jiang P, Dong CZ, Wang Q. Journal: Arch Pharm Res (2009): 1727 Detection of apoptosis based on the interaction between annexin V and phosphatidylserine Authors: Liu T, Zhu W, Yang X, Chen L, Yang R, Hua Z, Li G. Journal: Anal Chem (2009): 2410 Dynamic analysis of apoptosis using cyanine SYTO probes: from classical to microfluidic cytometry Authors: Wlodkowic D, Skommer J, Faley S, Darzynkiewicz Z, Cooper JM. Journal: Exp Cell Res (2009): 1706 Eurycomanone induce apoptosis in HepG2 cells via up-regulation of p53 Authors: Zakaria Y, Rahmat A, Pihie AH, Abdullah NR, Houghton PJ. Journal: Cancer Cell Int (2009): 16 Evaluation of cell surface expression of phosphatidylserine in ovarian carcinoma effusions using the annexin-V/7-AAD assay: clinical relevance and comparison with other apoptosis parameters Authors: Dong HP, Holth A, Kleinberg L, Ruud MG, Elstrand MB, Trope CG, Davidson B, Risberg B. Journal: Am J Clin Pathol (2009): 756 Glycogen synthase kinase-3 and Omi/HtrA2 induce annexin A2 cleavage followed by cell cycle inhibition and apoptosis Authors: Wang CY, Lin YS, Su WC, Chen CL, Lin CF. Journal: Mol Biol Cell (2009): 4153 Gold fluorescent annexin A5 as a novel apoptosis detection tool Authors: Kurschus FC, Pal PP, Baumler P, Jenne DE, Wiltschi B, Budisa N. Journal: Cytometry A (2009): 626 Induction of apoptosis in sonoporation and ultrasonic gene transfer Authors: Miller DL, Dou C. Journal: Ultrasound Med Biol (2009): 144 Mobilization of lysosomal calcium regulates the externalization of phosphatidylserine during apoptosis Authors: Mirnikjoo B, Balasubramanian K, Schroit AJ. Journal: J Biol Chem (2009): 6918 Peptidic targeting of phosphatidylserine for the MRI detection of apoptosis in atherosclerotic plaques Authors: Burtea C, Laurent S, Lancelot E, Ballet S, Murariu O, Rousseaux O, Port M, Vander Elst L, Corot C, Muller RN. Journal: Mol Pharm (2009): 1903 |
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