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請(qǐng)問為什么多糖過DEAE-52不出峰,上樣量250mg,流速為1ml/min,每管接6ml
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請(qǐng)問為什么多糖過DEAE-52不出峰,上樣量250mg,流速為1ml/min,每管接6ml 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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下面是幾個(gè)猜想 1、多糖是否完全溶于水,DEAE-52 Cellulose分離純化多糖的原理是酸性多糖倍吸附至陰離子交換柱上,經(jīng)水、鹽溶液洗滌后,因?yàn)檫@些溶劑與DEAE-52 Cellulos結(jié)合更緊密,會(huì)把多糖替換下來,多糖就洗脫下來了,如果不是溶液的話,離子交換的效果不好; 2、多糖在上樣的過程中,就應(yīng)該用離心管盛接,因?yàn)橹行远嗵墙M分無法被吸附,因?yàn)闆]有電荷啊,無法完成與DEAE-52 Cellulos的離子交換,如果你的糖是中性糖,上樣的時(shí)候就直接流下去了; 3、 如果你的糖是酸性糖,是否鹽溶液的濃度足夠大,以至于把酸性多糖洗下來。比如文獻(xiàn)做到1mg/mL的NaCl,我們可以再用1.2mg/mL的NaCl和1.4mg/mL的NaCl再洗滌一下; 4、洗滌液的體積是否足夠,我看的文獻(xiàn)是每個(gè)濃度梯度50mL或者100mL,但是我的樣品必須用超純水、0.1 mol/L NaCl、0.2 mol/L NaCl、0.4 mol/L NaCl、0.8 mol/L NaCl、1.0 mol/L NaCl和1.2 mol/L NaCl溶液各200 mL洗滌、 5、柱子的高度是否合理,如果柱子過高或者體積過大,會(huì)導(dǎo)致樣品很久很久才能遍布整個(gè)柱子填料中,此時(shí)已經(jīng)需要很多溶劑把樣品帶到柱子填料中了,所以還沒有多糖被洗脫下來; 6、濃度梯度最好多設(shè)幾個(gè),然后把每個(gè)梯度下的洗脫液體積增大些,就能看出來你的多糖主要分布在那個(gè)濃度梯度的洗脫液中了; |
新蟲 (初入文壇)
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請(qǐng)問DEAE-52用之前需要堿酸堿預(yù)處理嗎,我買的那個(gè)填料說明書說直接用緩沖液溶脹就能用了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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