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lyfdxb鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
富道干貨 | 警惕，這些因素影響細胞的生長！
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我們在使用細胞工廠來培養(yǎng)細胞時觀察細胞生長狀態(tài)就會發(fā)現(xiàn)細胞受各種因素的影響，這些因素看似不起眼，若不注意就會導致細胞負傷慘重。那么，這些小細節(jié)究竟如何影響細胞生長，在培養(yǎng)細胞時我們又該如何避坑呢？今天的富道課堂，帶大家學習影響細胞生長的因素。 細胞之間的接觸程度 正常細胞（二倍體）存在貼壁接觸抑制，長滿后細胞生長停止，而腫瘤細胞等非正常細胞，接觸抑制作用較弱，可生長至較高的細胞密度，但某些細胞過度生長，其損傷難以逆轉(zhuǎn)，所以培養(yǎng)細胞時不建議細胞密度太高。 劃重點：一般細胞匯合度達到 70-80% 即可傳代，切忌長得太滿。 細胞生長附著物 貼壁細胞在正常情況下都會貼壁，但一些細胞本身貼壁不牢或貼壁性差，這個時候包被附著物能夠促進細胞的黏附，所以在培養(yǎng)一些特殊細胞時，需要對培養(yǎng)瓶/皿進行包被后使用。常用的基質(zhì)有多聚賴氨酸（D 型、L 型）、明膠、膠原蛋白、細胞外基質(zhì)混合物，培養(yǎng)時可根據(jù)需要自行選擇。劃重點：細胞貼壁差時可使用基質(zhì)包被培養(yǎng)瓶/皿。 大多數(shù)細胞系在 pH7.4 左右時生長最好，而常規(guī)培養(yǎng)基的指示劑為酚紅，所以多數(shù)情況下，我們所見的培養(yǎng)基都呈紅色，但不同培養(yǎng)基的顏色會有差異，例如 DMEM 比 1640 顏色深一點。在培養(yǎng)細胞時，也可以根據(jù)培養(yǎng)基的顏色判斷細胞狀態(tài)，如隨著細胞生長，培養(yǎng)基顏色會變淺變黃。 劃重點：培養(yǎng)細胞時關(guān)注培養(yǎng)基顏色變化，發(fā)現(xiàn)異常及時處理。 培養(yǎng)溫度 對于大部分人源細胞和溫血動物細胞系來講，比較適宜的培養(yǎng)溫度是 37℃，因為這個溫度接近體溫，但為了安全可以再稍低一些，高于體溫的溫度要比低于體溫的溫度更易產(chǎn)生問題。對于禽類細胞，由于其體溫較高，所以培養(yǎng)溫度可以設(shè)置為 38.5℃左右。 劃重點：培養(yǎng)細胞時保持溫度穩(wěn)定，不要長時間敞開培養(yǎng)箱的門，并且不要將培養(yǎng)器皿大量重疊堆放在培養(yǎng)箱中，避免空氣不循環(huán)。 氣相組分 大部分培養(yǎng)基適合于 95% 空氣 5%CO2，但有部分培養(yǎng)基例外，如 L15 培養(yǎng)基適合于 100% 空氣，CO2 會導致培養(yǎng)液 PH 降低（培養(yǎng)液變黃），嚴重影響細胞生長；若需要用 L15 培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，但沒有 100% 空氣培養(yǎng)箱時，可以擰緊瓶蓋或換培養(yǎng)基（效果可能更好）培養(yǎng)。適用于 CO2 環(huán)境的培養(yǎng)基需保持培養(yǎng)瓶透氣。 劃重點：培養(yǎng)細胞時注意參照說明書選擇培養(yǎng)基，并注意培養(yǎng)壞境。 當然，影響細胞生長的因素還有很多，如細胞培養(yǎng)耗材選擇是否得當、質(zhì)量是否過關(guān)等。富道細胞專注高端生物耗材的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售，所有產(chǎn)品均按照 c-GMP 標準生產(chǎn)，遵循 ISO9001、ISO13485 質(zhì)量管理體系要求，從原料、生產(chǎn)成型、表面處理、密封檢測、內(nèi)包裝、外包裝、滅菌等方面層層把控，確保最終質(zhì)量。 |
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