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同一版膠上蛋白內(nèi)參有些明顯有些沒有出現(xiàn)？
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實(shí)驗(yàn)小白，實(shí)驗(yàn)室因?yàn)橐咔閿嗔�，上面也沒有師兄師姐帶，全程自己摸索，現(xiàn)在跑內(nèi)參（β-actin）的時(shí)候發(fā)現(xiàn)一板膠上面有些樣本跑不出來（就是8個(gè)樣本，2、3泳道很明顯，有2個(gè)泳道完全沒有，其他幾個(gè)泳道很淡），而同一板膠上的目的蛋白都出來了，1抗和2抗都是新配的。樣本都是同一批提的，用均漿器，RIPA裂解，加了PMSF，冰上操作，因?yàn)橛蠨NA絮狀物就用1ml注射器反復(fù)抽吸了10次，再離心（12000r，10min）取上清后分了三管（約100ul1管），馬上放到-80里，然后等著這批樣本都提完了之后再統(tǒng)一拿一管出來測濃度后分裝成更小的管（按100ug的體積分裝）。跑膠的時(shí)候就是一次拿一瓶這種小的再加RIPA和loading buffer 稀釋到50ul，100℃煮5min，一次上樣20ul。 所以各位老師們，我這是因?yàn)榉磸?fù)凍融了一次導(dǎo)致的β-actin降解了所以跑不出來嗎？@gyesang |
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