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28968058wj新蟲 (小有名氣)
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行為學(xué)實(shí)驗(yàn)|大小鼠抑郁模型評(píng)價(jià)方法
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抑郁癥是一種情感性精神障礙，以顯著而持久的心境低落、快感缺失、絕望感和無價(jià)值感為主要特征，并伴有植物神經(jīng)功能紊亂的綜合征。世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明抑郁癥的全球發(fā)病率達(dá)10%～15%，抑郁癥的高自殺和自殘率嚴(yán)重危害患者的身心健康、工作學(xué)習(xí)生活及社會(huì)交往，同時(shí)產(chǎn)生極大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。抑郁癥正成為繼心腦血管疾病之后導(dǎo)致人類死亡和致殘的第二大類疾病。 大鼠和小鼠抑郁行為檢測(cè)方法是基于興趣缺失、心境低落、絕望和無價(jià)值感為主要特征而設(shè)計(jì)的。抑郁行為實(shí)驗(yàn)方法主要包括糖水偏愛、新奇環(huán)境攝食抑制、新奇物體探索、曠場(chǎng)、強(qiáng)迫游泳、懸尾、獲得性無助等。 一、獲得性無助實(shí)驗(yàn)(learned helplessness test) 1、實(shí)驗(yàn)方法： 本實(shí)驗(yàn)主要分為模型的建立期和條件性回避反應(yīng)測(cè)試期。 (1) 模型建立期： a：實(shí)驗(yàn)當(dāng)天動(dòng)物應(yīng)放入測(cè)試箱(A室或B室) 中，適應(yīng)5min。 b：動(dòng)物應(yīng)在電擊箱內(nèi)接受30~ 60個(gè)運(yùn)行周期的循環(huán)電擊。每個(gè)運(yùn)行周期應(yīng)包括無信號(hào)不可逃避的雙室足底電擊期和間歇期，電擊時(shí)間應(yīng)為3～10s，間歇期時(shí)間應(yīng)為3～10s。電刺激頻率宜為5～15Hz，刺激電流強(qiáng)度應(yīng)為大鼠 0.65～1.80mA，推薦 0.8mA；小鼠0.15～0.6mA，推薦0.25mA。如采用電壓，大鼠應(yīng)為65～70V，小鼠30～36V。 (2)條件性回避反應(yīng)測(cè)試期： a：模型建立結(jié)束后第2天應(yīng)進(jìn)行條件性回避反應(yīng)測(cè)試。 b：動(dòng)物放入測(cè)試箱(A側(cè)或B側(cè)) 中，適應(yīng)5min后，進(jìn)行15～30個(gè)運(yùn)行周期的實(shí)驗(yàn)。 c：每個(gè)運(yùn)行周期的總時(shí)間應(yīng)為30s，包括3～10s的條件刺激(燈光/聲音) 、3～10s的條件刺激+非條件刺激(電擊條件同前)和5～25s間歇期(不給以任何刺激)。 d：重復(fù)上述步驟連續(xù)2～3d。 2、評(píng)價(jià)指標(biāo) (1) 逃避失敗次數(shù)(times of evasion failures)：動(dòng)物在設(shè)定的非條件刺激持續(xù)時(shí)間內(nèi)未完成回避反應(yīng)的總次數(shù)；逃避失敗次數(shù)與動(dòng)物的抑郁程度成正比。 抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn)：30次電擊，動(dòng)物逃避失敗次數(shù)大于25次或者與對(duì)照組相比具有顯著性增加(P＜0.05) 。 (2) 逃避潛伏期(escape latency)：實(shí)驗(yàn)開始后，動(dòng)物第1次穿梭至對(duì)側(cè)測(cè)試箱的時(shí)間；逃避潛伏期與動(dòng)物的抑郁程度成正比。抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn)：逃避潛伏期大于15s或者與對(duì)照組相比具有顯著性增加(P＜0.05) 。 (3) 其他：主動(dòng)回避次數(shù)、安全區(qū)時(shí)間(無電區(qū)域) 、運(yùn)動(dòng)總時(shí)間(實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物處于運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的時(shí)間)、運(yùn)動(dòng)總路程(實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物物理位移的總和)等實(shí)驗(yàn)指標(biāo)亦作為抑郁行為輔助評(píng)價(jià)指標(biāo)。這些指標(biāo)值越少，表明動(dòng)物抑郁程度越重。 二、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(forced swim test) 1、實(shí)驗(yàn)方法 (1) 實(shí)驗(yàn)前調(diào)節(jié)測(cè)試箱內(nèi)水溫，水溫應(yīng)為23～25℃。水深應(yīng)根據(jù)動(dòng)物體重進(jìn)行調(diào)整，動(dòng)物尾巴與測(cè)試箱底面保持一定距離。 (2) 如同時(shí)進(jìn)行多只動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，每兩只動(dòng)物間應(yīng)用不透明擋板隔開。 (3) 大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前1d預(yù)游，24h后進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。記錄5min內(nèi)動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間、游泳時(shí)間及攀爬時(shí)間。 (4) 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，應(yīng)在檢測(cè)當(dāng)天進(jìn)行，小鼠游泳時(shí)間應(yīng)為6min，記錄后4min的游泳時(shí)間、不動(dòng)時(shí)間及攀爬時(shí)間。 2、評(píng)價(jià)指標(biāo) 評(píng)價(jià)指標(biāo)應(yīng)采用動(dòng)物不動(dòng)、攀爬、游泳三類動(dòng)作的時(shí)間及次數(shù)進(jìn)行判定。 (1) 不動(dòng)(immobility)：動(dòng)物在水中停止掙扎，呈漂浮狀態(tài)，僅有輕微的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面。不動(dòng)時(shí)間越長表明抑郁程度越重。正常小鼠不動(dòng)時(shí)間在檢測(cè)時(shí)間的40%～80%內(nèi)；正常大鼠不動(dòng)時(shí)間在檢測(cè)時(shí)間的30%～70%內(nèi)；抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn)：不動(dòng)時(shí)間與對(duì)照組相比顯著性增加(P＜0.05) 。 (2) 游泳(swimming)：動(dòng)物進(jìn)行流暢、協(xié)調(diào)的運(yùn)動(dòng)，動(dòng)物四肢始終在水面以下。游泳時(shí)間和游泳距離越少，表明抑郁程度越重。 (3) 攀爬(climbing)：動(dòng)物四肢強(qiáng)有力伸出水面，并沿測(cè)試箱壁做劇烈的上下動(dòng)作。5min檢測(cè)期內(nèi)，SD大鼠攀爬時(shí)間60～130s。攀爬時(shí)間越少，表明動(dòng)物抑郁程度越重。 MDL近期開展的強(qiáng)迫游泳的視頻 三、懸尾實(shí)驗(yàn)(tail suspension test) 1、實(shí)驗(yàn)方法 懸尾實(shí)驗(yàn)多采用小鼠，其操作方法如下： (1) 實(shí)驗(yàn)開始前，動(dòng)物尾部懸吊使小鼠呈倒懸體位，頭部應(yīng)與懸尾箱底面保持一定距離。 (2) 如同時(shí)進(jìn)行多只動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，每兩只動(dòng)物間應(yīng)用不透明擋板隔開。 (3) 記錄檢測(cè)期動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間。 (4) 實(shí)驗(yàn)時(shí)間應(yīng)為6min，記錄后4min內(nèi)動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間。 2、評(píng)價(jià)指標(biāo) 用不動(dòng)、運(yùn)動(dòng)掙扎二類動(dòng)作行為的時(shí)間進(jìn)行判定。 (1) 不動(dòng)：動(dòng)物停止掙扎，身體保持垂直倒懸狀態(tài)，靜止不動(dòng)。動(dòng)物的在懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間越長表明抑郁程度越重。空白對(duì)照組c57小鼠不動(dòng)時(shí)間較長，均值多大于100s；空白對(duì)照組ICR小鼠不動(dòng)時(shí)間均值多小于 100s；抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn)：不動(dòng)時(shí)間與對(duì)照組相比有顯著性增加(P＜0.05) 。 (2) 運(yùn)動(dòng)掙扎：動(dòng)物有明顯可見的掙扎運(yùn)動(dòng)。運(yùn)動(dòng)掙扎時(shí)間越短，表明抑郁程度越重。 MDL近期開展的懸尾實(shí)驗(yàn)的視頻 四、糖水偏愛實(shí)驗(yàn)(sucrose preference test) 1、實(shí)驗(yàn)方法 大、小鼠糖水偏愛實(shí)驗(yàn)的操作方法上略有不同，對(duì)其分別進(jìn)行總結(jié)如下： (1) 大鼠糖水偏愛實(shí)驗(yàn)：訓(xùn)練期：動(dòng)物應(yīng)單籠飼養(yǎng)，進(jìn)行48h的蔗糖飲水訓(xùn)練。前24h給予兩瓶1%～2%蔗糖水，后24h，一瓶給予1%～2%蔗糖水，另一瓶給予飲用純水(中途交換兩個(gè)水瓶位置) 。大鼠禁食禁水14～ 23h 后，進(jìn)行糖水偏愛指數(shù)的測(cè)定：測(cè)定1h內(nèi)大鼠對(duì)兩瓶水的飲用量(g) 。 (2) 小鼠糖水偏愛實(shí)驗(yàn)：操作流程同大鼠。但在48h飲水訓(xùn)練時(shí)，應(yīng)全程給予1%～2%蔗糖 水和飲用水(中途交換兩個(gè)水瓶位置)。訓(xùn)練期結(jié)束后，禁水(不禁食)9～16h，測(cè)定8～15h內(nèi)(中間宜交換兩瓶位置1次)小鼠對(duì)兩瓶水的飲用量(g) 。 2、評(píng)價(jià)指標(biāo) 應(yīng)采用蔗糖偏嗜度(sucrose preference) 作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，蔗糖偏嗜度(%)=蔗糖水飲用量/(蔗糖水飲用量+飲用水飲用量)×100%。 抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn)：蔗糖偏嗜度低于0.4或者與對(duì)照組相比有顯著性減低(P＜0.05)。 五、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(open field test) 1、實(shí)驗(yàn)方法 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)操作簡單，在用于抑郁行為學(xué)評(píng)價(jià)中，無適期階段，操作步驟如下： (1) 實(shí)驗(yàn)前，動(dòng)物應(yīng)適應(yīng)檢測(cè)環(huán)境30～60min； (2) 動(dòng)物放入測(cè)試箱后，即開始檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間宜為5～10min； (3) 每次實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)從同一位置同一方向?qū)?dòng)物放入測(cè)試箱中央。 2、評(píng)價(jià)指標(biāo) (1)總路程(total distance)：動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)記錄時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生的物理位移累積；(2)速度(speed)：動(dòng)物在單位時(shí)間產(chǎn)生的物理位移。5min內(nèi)正常動(dòng)物總路程多為1000～2500cm，速度為3～8cm/s。動(dòng)物出現(xiàn)抑郁行為時(shí)，速度減少；(3)運(yùn)動(dòng)總時(shí)間(totalmove time)：動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)記錄時(shí)間內(nèi)的產(chǎn)生物理位移時(shí)所需的時(shí)間累積。正常動(dòng)物運(yùn)動(dòng)時(shí)間多大于檢測(cè)時(shí)間的30%; 抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn)：與對(duì)照組相比有顯著性減低(P＜0.05)；(4) 站立次數(shù)(number of standing)：動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)記錄時(shí)間內(nèi)的站立總次數(shù)。10min檢測(cè)時(shí)間，正常大鼠站立次數(shù)20～50次。 10min檢測(cè)時(shí)間，空白對(duì)照組小鼠站立次數(shù)60～130次; 抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn)：與對(duì)照組相比顯著減低(P＜0.05) 。 六、新奇事物探索實(shí)驗(yàn)(novel objective test) 新奇事物探索實(shí)驗(yàn)是一種較新的評(píng)價(jià)抑郁癥的典型癥狀：興趣缺失的行為學(xué)方法。其主要是研究動(dòng)物對(duì)新奇事物的探索行為，是基于動(dòng)物先天的尋求新奇的行為，并用此來評(píng)價(jià)抑郁癥模型是否存在興趣缺失癥狀的方法，一般情況下抑郁癥模型動(dòng)物在新奇事物實(shí)驗(yàn)中的探索行為減少。 1、實(shí)驗(yàn)方法 新奇事物探索實(shí)驗(yàn)分為適應(yīng)期和測(cè)試期兩個(gè)階段，操作步驟如下： (1) 適應(yīng)期：動(dòng)物放入自發(fā)活動(dòng)測(cè)試箱，適應(yīng)5min后，取出，放回原籠； (2) 測(cè)試期：在同一環(huán)境條件下引入一新物體(應(yīng)放入中心位置)，再將待測(cè)動(dòng)物面壁放入測(cè)試箱，開始實(shí)驗(yàn); (3) 檢測(cè)時(shí)間應(yīng)為10min。 2、評(píng)價(jià)指標(biāo) 潛伏期(latency period)：實(shí)驗(yàn)開始至動(dòng)物首次主動(dòng)探索(接觸)物體的時(shí)間。如規(guī)定檢測(cè)時(shí)間內(nèi)，動(dòng)物沒有接觸新物體，則潛伏期記錄為檢測(cè)時(shí)間。正常大鼠潛伏期多在130s以內(nèi)。抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn)：與對(duì)照組相比有顯著性增加(P＜0.05)。(注：動(dòng)物對(duì)新物體的探索標(biāo)準(zhǔn)：動(dòng)物口鼻在新奇物體≤2cm范圍內(nèi)，直指向新奇物體或直接接觸物體)。 |
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