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石辰風鐵蟲 (小有名氣)
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先上圖 【電腦端圖片上傳的按鍵點不了啊，等等手機發(fā)到二樓】 然后說一下背景 用的是15%的分離膠，上層是彩色膠但是不具備濃縮作用，電泳電壓是100v，電泳緩沖液都是新配的，膠兩端是空白，中間從左到右分別是marker（10~180kb），BSA標準蛋白（0.125mg/ml），樣品1（0.65mg/ml），樣品2（1.28mg/ml），樣品3（1.19mg/ml），樣品4（約2.3g/ml），樣品5（0.128mg/ml）marker，蛋白含量均用Bradford蛋白濃度測定試劑盒測定，marker的上樣量為6μl，橙紅色條帶為70kd，樣品及空白的上樣量為10μl。 樣品1~4是從某中藥動物藥的凍干粉中提取的，提取方法為石油醚破碎脫脂后，揮盡石油醚，然后加入0.9%NaCl溶液超聲破碎提取，提取后離心取上清液為總蛋白溶液，-80℃保存，也就是說上樣的樣品保存液為0.9%NaCl溶液。樣品5則是某種動物分泌的液體。 跑電泳前，5xloading buffer10μl+樣品和空白40μl混勻，然后煮5~10分鐘，放涼后上樣跑電泳。跑完電泳后，先在搖床上用蒸餾水把膠上沒跑完的那些loading buffer部分洗掉了，大概洗了一個多小時，洗到膠上只有marker跑過的痕跡（其實不知道這步做的對不對，只是發(fā)現(xiàn)蒸餾水洗的時候可以洗掉就洗了），然后用考馬斯亮藍快速染色液在搖床上染色（不用脫色，染色時間大概2小時左右）。 介紹完了情況，說一下問題。 發(fā)現(xiàn)電泳圖有以下幾個問題： 1. Marker躥到了別的條帶 在網上查說是鹽離子會導致躥帶，但是marker是沒有鹽離子的呀，難不成樣品中的NaCl也會導致躥帶？而且都是往左邊躥的，這兩個條帶上的樣都沒有NaCl。 2.顏色很淺，染色效果不好 看人家的染的都是那種深藍色效果很好 3.樣品1~4的條帶整個都是藍色的，條帶不明顯 是不是蛋白保存溶液的問題？這種整個條帶都是藍色的是不是說明蛋白降解了。 求各位大神解答，希望大家多提建議，謝謝！ |
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