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李鑫_LXXX新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助！pMG36e質(zhì)粒連接目的片段后轉(zhuǎn)入DH5α后紅霉素抗性平板長滿菌落
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Sample Text 2022年購入一瓶biotopped的紅霉素1g并用10mL無水乙醇溶解，0.22μmPES濾膜濾菌，分裝后-20保存。去年于LB平板上使用的紅霉素濃度為300 μg/mL，此時(shí)紅霉素具有良好的篩選效果。 由于疫情原因提前回家，2023年1月底返回學(xué)校接著做時(shí)發(fā)現(xiàn)紅霉素?zé)o法起到篩選陽性克隆的效果，當(dāng)即更換新的紅霉素，用與之前相同的方法進(jìn)行母液配置及保存，但從現(xiàn)在開始事情不對(duì)了——300μg/mL紅霉素的LB抗性平板紙上長滿了菌，根本無法篩選出陽性克隆，此時(shí)我提高抗生素濃度至600ug/mL，空載的E.coli DH5α仍能夠肆意生長。 不死心的我更換了酷來博的紅霉素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，同樣存在E.coli DH5α能夠生長的問題。 又看到有帖子講到：使用乙醇溶解的抗生素可不進(jìn)行濾菌處理直接使用。又購入一支抗生素，乙醇溶解后直接分裝保存。使用發(fā)現(xiàn)問題仍未解決。 在此試驗(yàn)期間，加入紅霉素時(shí)LB瓊脂培養(yǎng)基的溫度保證不對(duì)紅霉素活性產(chǎn)生影響，同時(shí)也試過降低培養(yǎng)溫度、縮短培養(yǎng)時(shí)間等操作，但試驗(yàn)依舊失敗。 Sample Text試問為什么會(huì)遇到這種情況？該如何解決問題？ |
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yoga玉
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4樓2024-04-28 10:44:57
Glenice Y
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你們感受態(tài)是自制?還是購買的?可以首先用感受態(tài)涂在含有你這個(gè)抗生素的板子上，看看是否長菌，如果長，那么證明這個(gè)感受態(tài)本身就有問題，此前我們實(shí)驗(yàn)室遇到過感受態(tài)本身就抗cam，導(dǎo)致于根本篩選不出來。如果確定感受態(tài)的問題，就可以從這個(gè)方面解決，如果不是，那用一個(gè)擁有這個(gè)抗性都菌圖板試試，長出來的菌是否為你要的，可以提質(zhì)粒去測序，證明抗生素是否有問題 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2023-04-25 14:40:07
343199625
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3樓2024-04-07 09:45:29
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