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Vath鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白偶聯(lián)熒光素后濃度測定
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最近純化蛋白然后在測定濃度方面遇到一些問題，所以來求助大家！ 1.單體和二倍體混合物的濃度如何確定（蛋白形成了dimer），然后還原成單體后會不會出現(xiàn)濃度變高的情況？———我的目的蛋白他的單體和dimer的消光系數(shù)是一樣的； 2.蛋白/抗體偶聯(lián)熒光基團(tuán)之后應(yīng)該如何測定濃度，像是偶聯(lián)AF 488/568這些熒光基團(tuán)-我用microdrop測的圖在下面——我總共只用了60ug蛋白，不考慮脫鹽濃縮損耗掉的，最后測反而含量增加了——我使用的蛋白是單體和dimer混合物，但是在偶聯(lián)之前加入了工作濃度為10mM的TCEP打開雙建； 3.偶聯(lián)熒光基團(tuán)后的抗體/蛋白應(yīng)該怎么保存——有的說不能-20℃，熒光會淬滅——但是很多在售的熒光蛋白都是-20℃保存的； 4.關(guān)于3 K filter（Millipore）的問題：使用3K濃縮置換20kd左右大小的蛋白，然后濃縮后取flow through和濃縮液做ELisa，發(fā)現(xiàn)流穿也有活性，也還有蛋白？可是20kD左右的是如何穿過3k的膜的？不管是新投入使用的filter還是用過一次的都一樣； 🤦♂️@hc-material@gyesang |
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