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專注多肽新蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[交流]
多肽同位素標(biāo)記的介紹及應(yīng)用
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隨著多肽在生物醫(yī)藥領(lǐng)域越來(lái)越廣泛和深入的應(yīng)用,多肽標(biāo)記和修飾性的需求和以前相比多出很多,并且對(duì)于質(zhì)量要求也在不斷上升,多肽的穩(wěn)定同位素標(biāo)記就是其中典型的一種。 同位素指具有相同原子序數(shù),但質(zhì)量數(shù)不同,亦即中子數(shù)不同的一組核素。如果某同位素能夠自發(fā)地從原子核內(nèi)部放出粒子或射線,同時(shí)釋放出能量,稱為放射性同位素。如H3、C13、P32、S35等。放射性同位素的原子核很不穩(wěn)定,會(huì)不間斷地、自發(fā)地放射出α射線或β射線或γ射線等,直至變成另一種穩(wěn)定同位素,即無(wú)放射性。同位素分為放射性同位素和穩(wěn)定同位素。 運(yùn)用同位素標(biāo)記示蹤法,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)多肽類代謝途徑研究。被同位素標(biāo)記過(guò)后可以隨時(shí)追蹤多肽在體內(nèi)或體外位置以及數(shù)量的變化,通過(guò)被同位素標(biāo)記的多肽隨著時(shí)間變化,在體內(nèi)隨之變化的情況,以此來(lái)表現(xiàn)出生物體的生理生化情況。 同位素標(biāo)記示蹤法具有高靈敏度、定位簡(jiǎn)單、定量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。使得多肽的同位素修飾技術(shù)在醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)等領(lǐng)域得到的關(guān)注也隨著上升。因?yàn)槎嚯耐凰貥?biāo)記使用的是穩(wěn)定同位素(如N15,C13)標(biāo)記,所以不能用自顯影等技術(shù)來(lái)顯現(xiàn)、追蹤同位素去向;只能用測(cè)量分子質(zhì)量或離心技術(shù)來(lái)區(qū)別同位素,通過(guò)質(zhì)譜儀,氣相層析儀,核磁共振等質(zhì)量分析儀器來(lái)測(cè)定。 現(xiàn)階段專肽生物合成的同位素標(biāo)記多肽主要為C13,N15兩種同位素(穩(wěn)定同位素)標(biāo)記的多肽。通過(guò)直接在多肽合成過(guò)程中引入被同位素標(biāo)記的氨基酸,以此達(dá)到標(biāo)記整條肽鏈的目的。目前不是所有氨基酸都會(huì)做同位素標(biāo)記,我們常用的同位素標(biāo)記的氨基酸有酪氨酸(Tyr),蘇氨酸(Thr),賴氨酸(Lys),精氨酸(Arg),谷氨酸(Glu)等。 同位素標(biāo)記的多肽與普通肽的區(qū)別在于其結(jié)構(gòu)中某一個(gè)或幾個(gè)氨基酸中的C被C13取代或者N被N15取代。因?yàn)橥凰貥?biāo)記多肽的原料(同位素標(biāo)記的氨基酸)價(jià)格比普通的貴,使得合成成本也隨之變高,這就直接導(dǎo)致了這種多肽價(jià)格的比普通的多肽要高一些。 |
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