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| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者_(dá)Marvin_將贈(zèng)送您 5 個(gè)金幣 | ||
_Marvin_新蟲 (初入文壇)
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[求助]
轉(zhuǎn)基因愈傷蛋白水平檢測不到，問題出在哪？
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求助各位大佬��！ 先說我遇到的問題哈：我拿到我的轉(zhuǎn)基因愈傷組織后對他們進(jìn)行了檢測（DNA、RNA和蛋白水平），DNA未能檢測到（載體+基因引物），RNA水平單轉(zhuǎn)愈傷僅僅提高了2倍表達(dá)量，而共轉(zhuǎn)愈傷提高了48倍（此前做的瞬轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)中并沒有發(fā)現(xiàn)該基因在另一個(gè)基因過表達(dá)時(shí)發(fā)生表達(dá)上調(diào)的現(xiàn)象），而蛋白水平不管是單轉(zhuǎn)還是共轉(zhuǎn)都未能發(fā)現(xiàn)相對應(yīng)的條帶，理論上蛋白大小在130Kda左右。 我自己的分析：愈傷一直放在篩選板上生長，長勢也很好，感覺應(yīng)該不是沒有轉(zhuǎn)進(jìn)去的問題；DNA提取可能存在問題，濃度比較低40左右；蛋白長度比較大，我做了6%的膠，但也僅僅在100多KDa有條帶，應(yīng)該不是目的帶，蛋白提取應(yīng)該沒啥問題，跑了actin也有均一的條帶。 請問問題出在哪？RNA水平既然能提高48倍，為什么蛋白水平卻不能檢測出來呢？可能是抗體的問題嗎？ |
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