 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1147 | 回復(fù): 1 | |||
[交流]
實驗室細胞污染常見類型及解決方案 已有1人參與
|
|
對于養(yǎng)細胞的人來說，可謂是談「污」色變，每次養(yǎng)細胞總讓人有種神經(jīng)錯亂，一進細胞房就想讓空氣都靜止下來，打開培養(yǎng)皿的一瞬間，連呼吸都變得如此多余。只要有任何異樣，無論是支原體還是雜菌，污染！污染！污染！猶如細胞實驗的魔咒，讓一切都無限重復(fù)…… 今天MDL科研助手盤點了細胞污染常見類型及解決方案，一篇在手，以后你就能與細胞愉快的玩耍了！細胞污染一般分為細菌污染、真菌污染、支原體感染、黑膠蟲污染。 01 細菌污染 ✦ 細菌污染最為常見，一旦操作稍有不當，就會引起細胞污染，細菌污染后顯微鏡下觀察呈現(xiàn)有黑色細條沙狀，當然，根據(jù)感染的細菌不同，所呈現(xiàn)的狀態(tài)也不盡相同，有球形、桿狀等，其次，培養(yǎng)液發(fā)黃，變渾濁，可明顯看見培養(yǎng)皿中有細沙狀的沉淀物，時不時還有異樣氣味發(fā)出，如下圖所示： 圖片 葡萄球菌污染 解決方案： 在培養(yǎng)基中加入抗生素處理，可以用四環(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素，前兩者的工作濃度是50μg/mL；鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。但是，細胞本身也有影響，狀態(tài)大不如從前，所以，防范于未然，正確操作、嚴格執(zhí)行無菌操作規(guī)范，定期清理消毒培養(yǎng)設(shè)施才是關(guān)鍵! 02 真菌污染 ✦ 表現(xiàn)：真菌的種類很多，污染的多是曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成淡黃色或是白色的漂浮物，一般肉眼可見，較易被發(fā)現(xiàn)，短期內(nèi)培養(yǎng)液多不變混濁。 倒置顯微鏡下可以看見細胞之間有縱橫交錯穿行的絲狀，樹枝狀或管狀菌絲，并漂浮在培養(yǎng)液中。很多菌絲在高倍鏡下可以看見鏈狀排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形，散在細胞上及細胞周邊生長。 有時通過顯微鏡可能會發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)瓶外壁生長的菌絲，較易誤認為污染。發(fā)現(xiàn)瓶外的菌絲后應(yīng)及時用酒精擦拭干凈。 圖片 霉菌污染 解決方案： 趕緊扔掉，不要再想挽救，即使再珍貴。然后徹底消毒滅菌培養(yǎng)間，CO2孵箱，器皿和培養(yǎng)液。 03 支原體污染 ✦ 支原體直徑約為 0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。培養(yǎng)條件沒變，又沒有明顯的污染跡象（渾濁、pH等），而細胞生長突然變慢、狀態(tài)變差、細胞邊界變得模糊；更換新的培養(yǎng)液，細胞狀態(tài)沒有恢復(fù)，細胞形態(tài)異常（拉絲、鋪展）。 注：支原體污染時細胞表現(xiàn)為長得不好，也不死亡，同時，培養(yǎng)基又是清亮的，時間長達一周也沒有什么變化，這時基本上可以判斷出是支原體污染了。 圖片 可見細胞核外與細胞表面會出現(xiàn)藍色螢光小點或是絲狀點，其形狀各異，與細胞共同被染成不規(guī)則的點狀物，說明細胞被支原體污染 解決方案： 1）對于非重要的細胞，如培養(yǎng)中的細胞、WCB的細胞等，將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對于較為重要的細胞，如來源珍貴或?qū)嶒炇抑屑毎２亓枯^小等可以采用以下（2）-（8）的方法。 2）用MRA處理：用支原體清除劑處理細胞，作用濃度為 25μg/ml，兩周可以清除支原體。 3）用清洗純化法清除支原體污染的方法：細胞營養(yǎng)馴化→優(yōu)質(zhì)細胞群的篩選→細胞清洗→反復(fù)離心洗滌，其原理是利用離心力、細胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達到清除支原體的目的。由于支原體個體小且除發(fā)酵支原體外多為細胞外寄生,所以通過反復(fù)洗滌細胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低至極限. 如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用，可達到更好的效果。 4）藥物輔助加溫處理：先用藥物處理后，再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時，可殺死支原體，但對細胞有不良影響。 5）使用支原體特異性血清：用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個月后仍為陰性。 6）動物體內(nèi)接種除菌法：把受支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動物皮下或腹腔中，借動物免疫系統(tǒng)消滅支原體，而腫瘤細胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長，待一定時間后，從體內(nèi)取出細胞再進行培養(yǎng)繁殖。 7）巨噬細胞吞噬法：從動物腹腔采取巨噬細胞，為排除其它細胞成分，可先進行純化，然后再加入被支原體污染的細胞培養(yǎng)液中混合培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，為檢查支原體是否已被消除干凈，可利用支持物培養(yǎng)法驗證，取出支持物逐日染色、鏡檢觀察，至支原體已被消除干凈為止。 8）使用支原體清除培養(yǎng)基，每2~3天更換1次新鮮培養(yǎng)液，換液時用無菌的平衡鹽溶液洗滌細胞1~2次；期間如果細胞密度過大，請保持細胞密度適當（貼壁細胞可能需要用胰酶消化），并更換新的培養(yǎng)器皿，3天之后，即可見明顯清除效果；處理15天后，可以用支原體檢測試劑盒進行檢測，檢測支原體是否殺滅完全；如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理6天；為避免細胞再次受到“支原體”的污染，以后每隔1個月進行支原體的常規(guī)檢測，以保證沒有新的支原體污染。 04 黑膠蟲污染 ✦ “黑膠蟲”是一種常見的細胞污染物，與細胞共生，隨細胞傳代而傳代�！昂谀z蟲”與細胞競爭性生長，對細胞生長不利，嚴重時導(dǎo)致細胞死亡。目前很多細胞存在被“黑膠蟲”污染的現(xiàn)象，對細胞培養(yǎng)及其后續(xù)實驗造成了極大地影響。 “黑膠蟲”污染的細胞常見的特性有以下幾點： 培養(yǎng)基不渾濁，但在顯微鏡下觀察細胞時，細胞周圍和培養(yǎng)液中有很多“小黑點”， 且隨著培養(yǎng)時間的延長“小黑點”逐漸增多，更換培養(yǎng)液或洗滌細胞不能將其去除； “黑膠蟲”污染的細胞，營養(yǎng)消耗快，需要頻繁更換培養(yǎng)液； “黑膠蟲”污染的細胞生長緩慢，細胞狀態(tài)差，空泡化嚴重，甚至還可能導(dǎo)致細胞形態(tài)的改變。 解決方案 對于黑膠蟲污染的細胞，最為快速有效的處理方式就是采用黑膠蟲清除劑對黑膠蟲進行清除，同時確保培養(yǎng)體系中的血清必須為無黑膠蟲和原蟲污染的優(yōu)質(zhì)血清。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
新疆大學(xué)地質(zhì)與礦業(yè)工程學(xué)院招生
已經(jīng)有32人回復(fù)
-
0856材料與化工353分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
282分材料專業(yè)求調(diào)劑院校
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
315食品工程求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
環(huán)境調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
接受26屆調(diào)劑生
已經(jīng)有20人回復(fù)
-
考研材料與化工，求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
歡迎211本科同學(xué)，過A區(qū)國家線，A區(qū)非偏遠一本，交叉學(xué)科課題組
已經(jīng)有35人回復(fù)
-
304求調(diào)劑（085602一志愿985）
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
294 英二數(shù)二物化 求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
2樓2024-03-12 10:36:06
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 星河???? 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[碩博家園] 2026級碩士研究生招生/調(diào)劑 +3 | 知足常樂的樂 2026-03-06 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 085600材料與化工 326 求調(diào)劑 +3 | 熱愛生活ing 2026-03-09 | 3/150 |
|
|
[考研]
材料學(xué)學(xué)碩308分/本科東北大學(xué)/一志愿西北工業(yè)大學(xué)/
 5+3
|
蘇堯幺幺 2026-03-03 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿東北大學(xué)080500，英一數(shù)二343分求調(diào)劑 +7 | Seele_v5 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +3 | 胡達靈 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 理學(xué)287分求調(diào)劑 +4 | 看看我. 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +3 | 朔朔話 2026-03-08 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)312分求調(diào)劑 +7 | T123 tt 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +5 | 一二LV 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 誠求調(diào)劑，323分 有專利/科研/實習經(jīng)歷 +6 | 橙子cyx 2026-03-06 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | 52hz~~ 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)0856材料與化工，前三科206，總分283，求調(diào)劑 +7 | 26考研求調(diào)劑 2026-03-06 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑推薦 +4 | 微辣不吃 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 呼呼？~+123456 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 2026年博士名額撿漏 +4 | 科研ya 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +3 | 馳光絕景 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工求調(diào)劑！ +5 | 化工考生111 2026-03-04 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 +4 | berdmond 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +4 | xuyuan111 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +3 | sgbl 2026-03-03 | 3/150 |
|