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[求助]
怎么把四個目的片段用NEB無縫連接酶連接到一起啊
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最近在做基因定點突變，想用同源重組的方法替換掉目的基因，設計了四個片段，左同源臂，抗性基因，目的片段，右同源臂，以下簡稱ABCD，我把這四段片段都擴了出來，但不能將四個片段用NEB酶連接起來，該怎么辦��？求大神指教啊 @starseacow 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2023-01-07 09:23:13
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怎么才算合適��？我的A、B、D都是1000bp左右，C是2500bp，A、B的濃度是350ng/ul,C、D濃度是150ng/ul左右，A和B初次連接用兩端的引物可以擴出來條帶，但是把條帶膠回收當模板擴，只有一條暗的條帶，反而單獨的A、B條帶變亮了，C和D試了幾次，都連不上 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2023-01-09 09:35:05
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