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星河????新蟲(chóng) (初入文壇)
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細(xì)實(shí)驗(yàn) | 細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)盤(pán)點(diǎn)胞
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細(xì)胞增殖 細(xì)胞增殖與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等是腫瘤研究的重要表型，是分子生物學(xué)和藥理學(xué)研究解決的問(wèn)題之一。通過(guò)在細(xì)胞中過(guò)表達(dá)或干擾某個(gè)基因研究基因?qū)?xì)胞增殖能力的影響，進(jìn)一步研究基因的功能，或?qū)?xì)胞進(jìn)行藥物處理，研究藥物對(duì)增殖的影響。 細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖，是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。細(xì)胞增殖的研究方法有很多，主要包括：CCK8/ CellTiter-Glo™等方法。 CCK-8實(shí)驗(yàn) Cell Counting Kit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。 目的：考察目的基因?qū)?xì)胞的增殖能力產(chǎn)生的影響或藥物對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響 材料：目的細(xì)胞、穩(wěn)轉(zhuǎn)株（空載、目的基因） 步驟：細(xì)胞收集——細(xì)胞鋪板——（藥物處理）——細(xì)胞培養(yǎng)0、6、24、48、72小時(shí)后加入CCK-8處理，酶標(biāo)儀檢測(cè) 結(jié)果： 圖片 優(yōu)勢(shì)： 操作簡(jiǎn)單，避免細(xì)胞計(jì)數(shù)過(guò)程中人為因素的影響； 細(xì)胞用量少，檢測(cè)靈敏度高，穩(wěn)定； 可反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，檢測(cè)時(shí)間靈活，不影響細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)； CCK-8產(chǎn)生的Formazan是水溶性的，無(wú)需換液，尤其適用于懸浮細(xì)胞,與MTT法相比更方便，更安全�！ � CTG實(shí)驗(yàn) 目的：考察目的基因?qū)?xì)胞的增殖能力產(chǎn)生的影響或藥物對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響 材料：目的細(xì)胞 步驟：細(xì)胞收集——細(xì)胞鋪板——（藥物處理）——細(xì)胞培養(yǎng)0、24、48、72、96小時(shí)后加入CellTiter-Glo™溶液用微孔板震蕩器5分鐘，于室溫放置10分鐘-酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光值 結(jié)果： 圖片 優(yōu)勢(shì)： 同普通的MTT、CCK8法相比，CellTiter-Glo™發(fā)光活細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)試劑具有最高靈敏度和較長(zhǎng)的信號(hào)持續(xù)時(shí)間，此系統(tǒng)已經(jīng)廣泛地應(yīng)用在生命科學(xué)研究領(lǐng)域中，如一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等; CellTiter-Glo™試劑和細(xì)胞培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基兼容，如RPMI1640、MEM、DMEM和 Ham's F12，也不受酚紅和有機(jī)溶劑的影響，誤差小，準(zhǔn)確率高�！ � 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞凋亡是腫瘤和發(fā)育研究的重點(diǎn)，同時(shí)也是藥理學(xué)研究的熱點(diǎn)。細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下，遵循自身的程序，自主結(jié)束其生命的過(guò)程。它是一個(gè)主動(dòng)的，高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過(guò)程。細(xì)胞凋亡的過(guò)程大致可分為以下幾個(gè)階段：接受凋亡信號(hào)→凋亡調(diào)控分子間的相互作用→蛋白水解酶的活化（Caspase）→進(jìn)入連續(xù)反應(yīng)過(guò)程�！ � 目的：通過(guò)慢病毒感染獲得過(guò)表達(dá)某基因的細(xì)胞株，利用Annexin-PE和7-AAD雙染法對(duì)正常細(xì)胞、對(duì)照組細(xì)胞、基因過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的凋亡情況進(jìn)行檢測(cè)，研究基因?qū)?xì)胞凋亡的影響�！ � 材料：質(zhì)粒與細(xì)胞株 步驟：細(xì)胞準(zhǔn)備——收集細(xì)胞——Annexin-PE和 7-AAD進(jìn)行雙染色——流式上機(jī)檢測(cè) 結(jié)果： 圖片 細(xì)胞侵襲和遷移 在腫瘤發(fā)展過(guò)程中，細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)的能力是重要的研究對(duì)象。相關(guān)的信號(hào)通路主要可以分為控制細(xì)胞黏附和控制細(xì)胞骨架。細(xì)胞的遷移與侵襲主要與細(xì)胞骨架和黏附相關(guān)。腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移能力的改變通常采用Transwell進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞劃痕也是測(cè)定腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)特性的方法，由于無(wú)法區(qū)別正常增殖和遷移細(xì)胞，應(yīng)用有局限性�！ � Transwell實(shí)驗(yàn) Transwell小室底層的一張有通透性的膜（一般為聚碳酸酯膜），將其放置于孔板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室。由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞。應(yīng)用Transwell可研究下層培養(yǎng)液中的成分對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)等的影響�！ � 腫瘤遷移實(shí)驗(yàn) 研究腫瘤細(xì)胞的遷移能力或特定情況下腫瘤細(xì)胞的遷移能力。常用8.0、12.0μm膜，上室種腫瘤細(xì)胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細(xì)胞會(huì)向營(yíng)養(yǎng)成分高的下室跑，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映腫瘤細(xì)胞的遷移能力�！ � 腫瘤侵襲實(shí)驗(yàn) 研究腫瘤細(xì)胞的侵襲能力或特定情況下腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。在聚碳酸酯膜上涂上一層基質(zhì)膠，模仿細(xì)胞外基質(zhì)，上室種腫瘤細(xì)胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，細(xì)胞要把基質(zhì)消化后才可以從上室遷移到下室，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量測(cè)定細(xì)胞的侵襲能力�！ � 目的：研究目的基因過(guò)表達(dá)/干擾對(duì)細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響 材料：正常細(xì)胞、對(duì)照慢病毒、過(guò)表達(dá)基因慢病毒 步驟：細(xì)胞復(fù)蘇——Transwell鋪板——細(xì)胞培養(yǎng)及染色——拍照 結(jié)果： 圖片 劃痕實(shí)驗(yàn) 腫瘤細(xì)胞在體外仍具有遷移的能力。細(xì)胞劃痕法是測(cè)定了腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)特性的方法之一。其借鑒體外細(xì)胞致傷愈合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停隗w外培養(yǎng)的單層細(xì)胞上，劃痕致傷，然后比較不同實(shí)驗(yàn)組中腫瘤細(xì)胞遷移的能力。 目的：使用篩選的穩(wěn)定株（轉(zhuǎn)對(duì)照病毒、過(guò)表達(dá)基因病毒），通過(guò)對(duì)空細(xì)胞、對(duì)照穩(wěn)轉(zhuǎn)、目的基因穩(wěn)轉(zhuǎn)三組細(xì)胞進(jìn)行劃痕寬度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，研究基因?qū)?xì)胞遷移能力的影響。 材料：病毒和細(xì)胞株，目的細(xì)胞來(lái)源于客戶，穩(wěn)定株瀚鴻構(gòu)建 步驟：細(xì)胞鋪板——?jiǎng)澗�——細(xì)胞培養(yǎng)及拍照——統(tǒng)計(jì)分析 結(jié)果： 圖片 細(xì)胞周期檢測(cè) 細(xì)胞周期（cell cycle）是指細(xì)胞從一次分裂完成開(kāi)始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過(guò)程，分為間期與分裂期兩個(gè)階段。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度，單個(gè)細(xì)胞的周期測(cè)定可采用縮時(shí)攝影的方法，但它不能代表細(xì)胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測(cè)群體周期�！ � 目的：通過(guò)慢病毒感染獲得基因過(guò)表達(dá)的細(xì)胞株，利用PI染色法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞周期的變化。從而研究目的基因?qū)?xì)胞周期的影響。 材料：目的細(xì)胞、病毒 步驟：細(xì)胞準(zhǔn)備——樣品收集——上機(jī)檢測(cè)——數(shù)據(jù)分析 結(jié)果： 圖片 克隆形成實(shí)驗(yàn) 目的：通過(guò)目的基因過(guò)表達(dá)/干擾細(xì)胞組、空細(xì)胞組與陰性對(duì)照組(空病毒)克隆形成數(shù)量的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，研究基因?qū)?xì)胞群體依賴性和增殖能力的影響�！ � 材料：病毒和細(xì)胞株 步驟：鋪板——細(xì)胞培養(yǎng)——觀察克隆，染色，計(jì)算克隆形成率 結(jié)果： 圖片 MDL科研平臺(tái)具備動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、病理檢測(cè)、蛋白檢測(cè)，分子生物學(xué)檢測(cè)、快速檢測(cè)等六大實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，其中細(xì)胞平臺(tái)擁有獨(dú)立的無(wú)菌細(xì)胞培養(yǎng)室、流式細(xì)胞儀、超高速冷凍離心機(jī)等設(shè)備，主要開(kāi)展細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞爬片、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建、雙熒光素酶報(bào)告基因、慢病毒包裝、流式細(xì)胞術(shù)鑒定、流式周期、流式凋亡、細(xì)胞系STR鑒定等服務(wù)。 |
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