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里來醫(yī)學(xué)銅蟲 (小有名氣)
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細(xì)胞培養(yǎng)的部分優(yōu)化策略
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細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是細(xì)胞系的培養(yǎng)，對(duì)常規(guī)細(xì)胞而言，需要善于總結(jié)經(jīng)驗(yàn)。然而除了基本步驟，還有哪些技巧可以讓細(xì)胞養(yǎng)的更加漂亮呢？ 1. 不同的細(xì)胞，喜歡的環(huán)境是不一樣的 這個(gè)不僅僅是說培養(yǎng)基的不同，還有就是細(xì)胞生長的空間密度問題。 有一些細(xì)胞是數(shù)量多一點(diǎn)比較好生長，生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細(xì)胞。譬如內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點(diǎn)細(xì)胞狀態(tài)會(huì)生長的比較好，譬如巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞。尤其是巨噬細(xì)胞，生長速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時(shí)就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞，這樣細(xì)胞狀態(tài)會(huì)比較好。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時(shí)候，細(xì)胞形態(tài)基本上就會(huì)差了，老化的會(huì)比較多，對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長空間密度問題。 2. 關(guān)于培養(yǎng)瓶內(nèi)加入培養(yǎng)基的量的問題 這個(gè)確實(shí)需要自行摸索。有些細(xì)胞反而是培養(yǎng)基少一點(diǎn)相反細(xì)胞形態(tài)會(huì)長得比較好。對(duì)于生長速度快的細(xì)胞，易生長的細(xì)胞加少一點(diǎn)培養(yǎng)基細(xì)胞形態(tài)會(huì)更好。但是要注意換液掌握 3. 關(guān)于選擇培養(yǎng)瓶的問題 生長速度快的細(xì)胞在玻璃瓶內(nèi)生長的狀態(tài)會(huì)比一次性塑料瓶相對(duì)好一些。而對(duì)于同一種細(xì)胞，在其生長旺盛快速的時(shí)期在玻璃瓶內(nèi)的生長狀態(tài)也比塑料瓶內(nèi)好。這可能是因?yàn)樗芰掀勘炔Ａ扛菀踪N壁。生長速度快的細(xì)胞在塑料瓶這種相對(duì)「更安逸」的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。 所以對(duì)于生長速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài)，塑料瓶比玻璃瓶會(huì)好，對(duì)于生長速度慢的細(xì)胞，玻璃瓶則會(huì)更好。同樣，對(duì)于同一種細(xì)胞，在其生長速度慢的時(shí)候，塑料瓶會(huì)好一點(diǎn)，比如剛剛復(fù)蘇的時(shí)候，或者原代培養(yǎng)的時(shí)候。而在其生長旺盛的時(shí)候，玻璃瓶則相對(duì)會(huì)好一點(diǎn)。 4. 傳代時(shí)消化的問題 對(duì)于需要消化傳代的細(xì)胞，每一次的消化都是對(duì)這個(gè)細(xì)胞存活與否，狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗(yàn)。 在消化的過程中，加入胰酶后，所有細(xì)胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個(gè)問題就是，細(xì)胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對(duì)細(xì)胞是不公平的，他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有「脾氣」。 5. 關(guān)于換液傳代時(shí)候洗瓶的問題 對(duì)于用 DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞，你在洗的時(shí)候如果是用無血清1640去洗細(xì)胞在隨即后的幾次中會(huì)比用 DMEM 洗的長的要好。同樣，用 1640 培養(yǎng)的也有這個(gè)現(xiàn)象。 也可以用 PBS 來洗，洗的效果和用無血清培養(yǎng)基洗的效果基本上是一樣的，對(duì)于有些細(xì)胞會(huì)更勝一籌。洗的目的主要是洗去培養(yǎng)瓶里殘留的血清，防止它對(duì)胰酶的影響。這樣能夠保證胰酶的消化能力優(yōu)先，是很關(guān)鍵的一點(diǎn)。 |
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